Tris飽和酚配制及作用

Tris 飽和酚是用 Tris-HCl（pH8.0）飽和過的重蒸酚，為淺黃色透明液體，有刺激性氣味，上層為 Tris 鹽酸緩沖液，pH>7.8，下層為酚相，內(nèi)加有抗氧化的 8-羥基喹啉。Tris 飽和酚用于分離 DNA。

   Tris 飽和酚的配置：冰箱取出重蒸酚,室溫放置，之后 68 度水浴溶化,切勿立即放入 68度的水浴中，以防玻璃炸裂，加 8－羥基喹啉 0.1％和β－巰基乙醇 0.2％,（原液14.4MOL/ML），混勻，溶液呈現(xiàn)黃色，倒入分液漏斗中（也可在燒杯中進(jìn)行）加入等溶劑的 1MOL/ML 的 Tris(PH8.0),反復(fù)混勻后，靜分層；放出下層黃色酚液，棄上層、加固體Tris 約 1g/100ml,搖勻，去水相、加 0.1MOL/ML Tris(PH8.0)平衡數(shù)次， PH 為 8.0、0.1MOL/ML Tris(PH8.0)于棕色瓶中 4 度保存。

  組織裂解液，確保 pH 為 8.0 左右(可加入 0.1 體積的 1M Tris-HCl，pH8.0，將其調(diào)為 8.0 左右)，再加入 0.5 體積的 Tris 飽和酚（使用時(shí)靜置，取下層酚相使用。上層為Tris-HCl 溶液，是為阻止酚與空氣接觸，以減緩酚的氧化），0.5 體積CCL4：異戊醇(24：1) ，振蕩 10 秒鐘后冰浴 15 分鐘。離心后取水相（上層）加等體積異丙醇沉淀 DNA，75%乙醇漂洗 1 次，微干燥后溶于適量 TE 中備用。

  Tris 飽和酚一般 PH 大于 7.8，用于 DNA 的提取。其中，酚是強(qiáng)的蛋白變性劑，可以使細(xì)胞或組織中的蛋白質(zhì)變性析出，而 Tris 的主要作用是防治止酚類氧化，若酚類氧化，則會形成醌（兩個(gè)苯環(huán)），醌含有強(qiáng)自由基，會破壞核酸結(jié)構(gòu)。同時(shí)，由于 PH 值大于 7，在堿性環(huán)境中 DNA 處于水相，RNA 處于有機(jī)相，從而分離上清，即可得到 DNA。

  Tris 平衡酚有較強(qiáng)的腐蝕性，應(yīng)盡量避免皮膚接觸或吸入體內(nèi)。如發(fā)現(xiàn)變?yōu)榧t色或棕色，表明已發(fā)生氧化，不能繼續(xù)使用。

  北京索萊寶科技有限公司自產(chǎn)產(chǎn)品 Tris 飽和酚又名 Tris 平衡酚，在堿性條件下（pH>7.8）用于 DNA 的提取