DAB染色液的使用方法及注意事項(xiàng)

DAB染色液用于免疫組化染色，應(yīng)用在Dako 自動(dòng)染色系統(tǒng)上。

DAB染色液的使用方法

1.DAB顯色液配制

10mM Tris-HCl (pH7.6)   9mL  +DAB (diaminobezidin 3，3-二氨基聯(lián)苯胺) +0.3%(W/V)  NiCl2 或CoCl2   1mL ,顯色時(shí)加入5-10mL 30%H2O2 混勻后立即使用 

2. 顯色

準(zhǔn)備好含有待測蛋白的固相膜：包括電泳、轉(zhuǎn)印、封阻、一抗（或生物素）處理、辣根過氧化酶（HRP）標(biāo)記的二抗（或鏈霉親和素）處理、清洗等步驟。 

3.加入適量的DAB顯色液，鋪滿整個(gè)固相膜表面（可按比例增減）。 

4. 置于平式搖蕩儀上，在室溫下孵育25分 鐘，避免光照（暗室操作），直棕褐色沉淀出現(xiàn)。 

5.用鑷子夾起固相膜，放進(jìn)無離子水里清洗。  

6.空氣中晾干。   

7. 拍照記錄 。

DAB染色液的注意事項(xiàng)

1． DAB溶液應(yīng)低溫密封保存。如有結(jié)晶析出，應(yīng)確保結(jié)晶*溶解再行使用； 

2． 顯色工作液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配，新鮮配制的工作液應(yīng)為無色或淺棕色，如顏色過深，請(qǐng)勿使用； 

3． DAB在常溫下不穩(wěn)定，每次取用后均應(yīng)及時(shí)加蓋密封放回冰箱，以免因DAB分解影響實(shí)驗(yàn)，或因滲漏造成實(shí)驗(yàn)環(huán)境污染； 

4． DAB有潛在致突變作用，操作時(shí)應(yīng)注意穿戴好防護(hù)用具。