考馬斯亮藍(lán)染色原理

    考馬斯亮藍(lán)染色法也稱考馬斯藍(lán)法(coomassie blue staining)又稱Bradford法。是測定蛋白質(zhì)含量屬于染料結(jié)合法的一種。由于其突出的優(yōu)點(diǎn)，正得到越來越廣泛的應(yīng)用。

下面就著重介紹下考馬斯亮藍(lán)染色法原理。

    考馬斯亮藍(lán)染色是測定蛋白質(zhì)含量屬于染料結(jié)合法的一種。在游離狀態(tài)下呈紅色，大光吸收在488nm;當(dāng)它與蛋白質(zhì)結(jié)合后變?yōu)榍嗌鞍踪|(zhì)-色素結(jié)合物在595nm波長下有大光吸收。其光吸收值與蛋白質(zhì)含量成正比，因此可用于蛋白質(zhì)的定量測定。

    蛋白質(zhì)與考馬斯亮藍(lán)G-250結(jié)合在2min左右的時(shí)間內(nèi)達(dá)到平衡，完成反應(yīng)十分迅速;其結(jié)合物在室溫下1h內(nèi)保持穩(wěn)定。該法是1976年Bradford建立，試劑配制簡單，操作簡便快捷，反應(yīng)非常靈敏，靈敏度比Lowry法還高4倍，可測定微克級蛋白質(zhì)含量，測定蛋白質(zhì)濃度范圍為0～1 000μg/mL，小可測2.5μg/mL蛋白質(zhì)，是一種常用的微量蛋白質(zhì)快速測定方法。

    考馬斯亮藍(lán)分為R-150、R-250、R-350、G-250等。其中R-350為靈敏，R為紅藍(lán)色，G為綠藍(lán)色。索萊寶是專業(yè)生化試劑供應(yīng)商。提供考馬斯R-250、G-250等染色液，常備現(xiàn)貨。

      G-250                                  R-250