丙酮酸脫氫酶活性檢測試劑盒的檢測步驟

  丙酮酸脫氫酶(PDH)是一種線粒體酶,可以催化丙酮酸鹽向乙酰輔酶A和CO2的轉(zhuǎn)化,同時(shí)還是聯(lián)系三羧酸(TCA) 和糖酵解的媒介。該酶受到磷酸化作用的抑制,可在脫磷酸作用下激活。PDH的突變還與丙酮酸脫氫酶的效率（產(chǎn)生乳酸和神經(jīng)機(jī)能障礙）和亞急性壞死性腦脊髓病有關(guān)。通過酶促分析,可以測定丙酮酸脫氫酶的活性,該反應(yīng)會產(chǎn)生與所含的酶活性成正比的比色 (450 nm) 產(chǎn)物。一單位丙酮酸脫氫酶的定義為,37 ℃下,每分鐘生成 1.0 Μmol 的NADH 所需的酶量。

  丙酮酸脫氫酶活性檢測試劑盒的測定步驟：

  1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至605nm，蒸餾水調(diào)零。

  2、每個(gè)樣本需要900μL工作液，按樣本數(shù)加取出一定量的工作液于37°C (哺乳動物)或25°C (其他物種)中孵育5min。

  3、空白管:在1mL比色皿中加入900L工作液和50H水，混勻，立即記錄605nm處初始吸光值A(chǔ)1和1min后的吸光值A(chǔ)2，計(jì)算△A 空白=A1-A2。

  4、測定管:在1mL比色皿中加入900風(fēng)工作液和50H樣本，混勻，立即記錄605nm 處初始吸光值A(chǔ)3和1min后的吸光值A(chǔ)4，計(jì)算△A測定=A3-A4。