　　磷酸化蛋白提取試劑盒適用于從各種原代或傳代細(xì)胞和各種實(shí)體組織，如腦、脊髓、神經(jīng)結(jié)或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結(jié)締組織等哺乳動物組織中提取磷酸化蛋白。磷酸化蛋白提取試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

　　操作方法：

　　1、組織總蛋白的提取

　　(1)在1ml的冷裂解液中各加入10ul的***酸酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和PMSF混勻，放置在冰上備用;

　　(2)稱取0.1g的新鮮組織，放置于玻璃勻漿器的入口緩沖處，用眼科剪將組織塊盡可能的剪碎，然后加入0.5-1ml 的新配置的裂解液，研磨直至沒有明顯的組織塊，這個過程注意冰上操作;

　　(3)將組織勻漿液移入1.5ml的EP管中，4 ℃ 12000g 離心30min;

　　(4)吸取上清至新的管中;

　　(5)進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn)。

　　2、細(xì)胞總蛋白的提取

　　(1)裂解液的用量:107個細(xì)胞需要裂解液1ml;

　　(2)貼壁細(xì)胞:棄去培養(yǎng)基，用冷的PBS 洗兩次，棄去PBS，然后加入計(jì)算好的細(xì)胞裂解液;在冰上用細(xì)胞刮刀進(jìn)行刮離細(xì)胞，將刮離的細(xì)胞裂解液移入EP管中，顛倒裂解20-30min;

　　(3)懸浮細(xì)胞:4℃ 400g 離心收集細(xì)胞，用冷的PBS洗兩次細(xì)胞，同樣按細(xì)胞數(shù)加入裂解液，渦旋10s，放置冰上裂解10min，重復(fù)3-4次;

　　(4)裂解完畢之后，將細(xì)胞裂解液4℃12000g離心30min;

　　(5)將上清移入新的EP管中;進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn)。

　　(提取好的蛋白建議保存于-80℃，即用即取，避免反復(fù)凍融，避免長時間儲存。)

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