生化試劑盒常見問題

生化試劑盒通過化學反應/酶促反應或物質結構特點測定樣本中物質含量或酶活；所用儀器一般為分光光度計和酶標儀，兩者的測定原理都是 朗伯比耳定律: A=kbc，即當適當波長的一束平行單色光照射固定濃度均勻溶液時，其吸光度與光通過的液層厚度成正比。土壤、水質、動植物組織、血清、細胞細菌、食品等 樣本均可以進行測定。

首先根據(jù)本實驗的實際情況選擇，實驗室有酶標儀的且有該檢測波長的可以選擇微量法試劑盒；實驗室有分光光度計的，且有相應規(guī)格的比色皿既 可以選擇常量法也可選擇微量法試劑盒。建議購買前先閱讀的說明書，對其中自備的儀器和試劑進行確認。

如果收到試劑盒，暫時不用，可按照外包裝上指示的溫度統(tǒng)一保存；拆開包裝后，請按照每個試劑的保存溫度進行保存，有些試劑忌反復凍融； 有些試劑為粉劑，溶解之后性質不穩(wěn)定。

一般生化試劑盒有效期為6個月，也有特殊貨號生化試劑盒有效期為1年；具體以實際收到貨物的標簽信息為準。

強烈建議客戶先拿出2-3個預期結果差別較大的樣本做預實驗。在實驗的過程中，首先將試劑盒中的說明書通讀一遍， 檢查試劑盒中各成分的量與說明書符不符合，溶解或使部分試劑回復至室溫，然后處理樣本，樣本提取完成后，再溶解一些粉劑，開始實驗。

一般同一個系列的試劑盒中，酶活測定的提取液類似，含量測定的提取液類似。但具體的請具體查詢。

新鮮樣本和冷凍樣本都可用于大多數(shù)指標的測定，有一些生理活性物質容易降解，建議用新鮮樣本測定， 如輔酶Ⅰ、輔酶Ⅱ、谷胱甘肽、線粒體復合體等。冷凍樣本建議在-70℃或者液氮中保存。一般樣本在4度能都 保存一周，-20保存一個月，-80保存3個月

由于土壤顆粒大小不一致導致水分含量不一樣，且取樣量較少，為了保證測定的重復性，建議將鮮土風干并 過篩后取樣。若用鮮土測定，需保證樣本的顆粒大小一致水分含量相似，建議過40目篩后取樣，且同時測定 的樣本要保持一致，最好不要一組樣本用風干土，一組用鮮土，風干后的土樣在-20保存1個月測定大部分酶活 幾乎不會有損失；某些土壤的成分如硝態(tài)氮、銨態(tài)氮等在風干過程中會發(fā)生顯著變化，必須用新鮮樣品進行分析。

樣本研磨我們一般用到三種方法： 第一種：將研缽置于冰盒上勻漿即冰浴勻漿，在勻漿的過程中注意勻漿器浸于冰中，防止因為摩擦引起的溫度過高，提取液可以在勻漿過程中或者勻漿后加入。 第二種：用液氮勻漿，液氮研磨前將樣本洗凈，盡量剪成小塊，放入研缽中，加入液氮研磨，液氮揮散后盡快加入第二次液氮直至研磨成粉末狀，避免其過程中 反復凍融，同時要做好保護措施，防止凍傷手指。完成后將粉末收集到離心管中加入緩沖液。樣本可以提前稱量號也可研磨完后稱量。 第三種：使用勻漿機進行勻漿，將稱好的組織放入離心管中，加入適量提取液，加入鋼珠。并將模塊提前遇冷，按照機器指示進行操作。一般的動物組織用 該方法效果尚可，有些機器對植物組織的處理效果不好。

使用分光光度計的用戶，用蒸餾水或相應的有機試劑直接調零。使用酶標儀的用戶，可以在一個孔里加入200μL的蒸餾水或去離子水，作為調零孔， 也可不用調零，后續(xù)計算中會有空白孔。

樣本測定值若超出檢測范圍，可以將提取的上清液用提取液稀釋后重新測定。一般從高到低，按照2倍，5倍，10倍，20倍的順序，選擇一個合適的稀釋 倍數(shù)。樣本測定值若低于檢測范圍，可以提高樣本濃度，如稱取0.2g樣本加入1mL提取液勻漿，相當于將樣本濃縮2倍。

（1）根據(jù)說明書中測定溫度，提前打開保溫設備（如水浴鍋），設到溫度，在達到溫度后，把冷藏的試劑轉移到保溫設備中保溫10-30分鐘以上，以保證反應一開始，就在溫度中進行。 （2）對于擁有酶標儀的用戶，直接提前預熱，在達到設定溫度后，可以直接把預熱后的試劑，加入酶標板，然后開始反應。 （3）在保溫設備（水浴鍋和金屬浴，最好是前者）進行。注意提前對保溫設備進行預熱，達到設定溫度后再進行反應。但是僅適用于能夠終止的反應。 （4）對于瞬間完成的反應，或者對溫度不敏感的反應，為了提高重復性，最好在同一溫度下完成檢測。例如打開空調，設定在室溫，如25℃。 當然，所有控溫設備，都要進行預熱。

(1)50管的試劑盒，常量法試劑盒，用分光光度計檢測。1mL的比色皿檢測。 （2）100管的試劑盒，微量法試劑盒，用酶標儀（酶標板）或者分光光度計（0.25 mL比色皿）檢測。

（1）50T/48S：50T指能夠做50次測定，48S指可以測試48個樣品。如果每個樣品重復測定3次，那么只能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者 對照管。值得特別注意的是，50T/24S中由于每個樣品測定都需要做對照，因此能夠測定樣品的數(shù)量僅為8個（假設做3次重復） （2）100T/96S：100T指能夠做100次測定，96S指可以測定96個樣品，如果每個樣品重復測定3次，那么只能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或 者對照管。 注意由于瓶璧和移液器吸附等，通常要比理論測定次數(shù)少1~3次。其它規(guī)格的含義依次類推。值得特別注意的是，100T/48S中由于每個樣品測 定都需要做對照，因此能夠測定樣品的數(shù)量僅為16個（假設做3次重復）。

一般試劑為粉劑的，可能更多的考慮到配成溶液后的穩(wěn)定性差，如NADH，或者和其他試劑溶解在一起會在不同的溫度下有其他的化學反應。 -20℃保存的粉劑建議溶解后分裝保存，避免反復凍融。