血清質(zhì)量的檢查方法

檢查方法：
已證明無(wú)外源因子污染的牛細(xì)胞培養(yǎng)物，在細(xì)胞生長(zhǎng)液中加15％待測(cè)血清，連傳3代共21天。陰性對(duì)照細(xì)胞培養(yǎng)液
中加15％已知無(wú)病毒污染的牛血清，與試驗(yàn)組同條件下進(jìn)行。在觀察期內(nèi)注意細(xì)胞形態(tài)變化或細(xì)胞病變。在觀察
期內(nèi)第14天待檢樣品和對(duì)照樣品用標(biāo)準(zhǔn)病毒檢測(cè)方法檢查。

如待檢細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)胰酶消化后分種到6個(gè)含蓋玻片的容器內(nèi)。陰性對(duì)照樣品按同樣方法。再將牛腹泄病毒、牛細(xì)
小病毒、牛腺病毒、狂犬病毒和呼腸弧病毒分別加入待檢培養(yǎng)物蓋玻片容器內(nèi)作為陽(yáng)性對(duì)照，再培養(yǎng)7天，用熒光
抗體技術(shù)進(jìn)行檢查。

細(xì)胞病變或病毒引起的其他改變通過(guò)蘇木精或伊紅染色進(jìn)行觀察。取另外一個(gè)待檢細(xì)胞培養(yǎng)瓶用人“O”紅細(xì)胞、
豚鼠紅細(xì)胞和新鮮雞紅細(xì)胞作血球吸附病毒檢查。試驗(yàn)在2～8℃和20～24℃進(jìn)行。陰性對(duì)照細(xì)胞預(yù)先感染副流感
Ⅲ型病毒作為陽(yáng)性對(duì)照。未感染的細(xì)胞作為陰性對(duì)照。

3）內(nèi)毒素檢測(cè)
用鱟試劑檢查。

4）細(xì)菌噬菌體檢查
主要檢查E.Coli（C300 or K-12）噬菌體。

5）激素含量測(cè)定
每批FBS對(duì)某些激素含量都要進(jìn)行測(cè)定，包括：雌二醇、胰島素、孕硐、睪丸素、甲狀腺素等。

6）血紅蛋白檢測(cè)
血紅蛋白與氧合血紅蛋白的比≥70％，血紅蛋白含量≤mg15/dl。

7）細(xì)胞生長(zhǎng)效果測(cè)定
a.細(xì)胞克隆效果測(cè)定
細(xì)胞選擇：Sp20/Ag-14 或P3X63-Ag8.653
血清濃度與細(xì)胞數(shù):
10％血清／1個(gè)細(xì)胞／孔
4％血清／5個(gè)細(xì)胞／孔
細(xì)胞培養(yǎng)基RPMI－1640， 96孔培養(yǎng)盤(pán)36℃±2℃，5％二氧化碳培養(yǎng)10～
15天。試驗(yàn)中選擇一個(gè)已知參考牛血清作對(duì)照。
克隆效率計(jì)算：
克隆效率＝（陽(yáng)性孔平均數(shù)/ 培養(yǎng)孔總數(shù)） X100％ 

相對(duì)克隆效率＝待測(cè)血清克隆效率/參考血清克隆效率

b.貼壁效率試驗(yàn)：
用人的傳代細(xì)胞作每批血清的貼壁效率試驗(yàn)，A549（人肺癌細(xì)胞）該細(xì)胞可以反應(yīng)出低濃度血清的貼壁變化。采
用6孔培養(yǎng)盤(pán)每批血清用兩種濃度和兩種不同的細(xì)胞接種數(shù)即10％血清――100細(xì)胞／孔，4％血清200介細(xì)胞／孔
。放36℃±2℃，濕潤(rùn)5％二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)10～14天，計(jì)算著色細(xì)胞克隆，確定貼壁效率。從這兩種不同血清
濃度來(lái)確立實(shí)驗(yàn)血清支持細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)的水平，分析兩種試驗(yàn)條件下平均貼壁效率。

貼壁效率（％）＝（每孔克隆平均數(shù)/ 每孔活存的培養(yǎng)細(xì)胞平均數(shù)） X100％

相對(duì)貼壁效率＝被測(cè)血清貼壁效率/參考血清貼壁效率
c. 二倍體纖維細(xì)胞促生長(zhǎng)試驗(yàn)
人二倍體細(xì)胞株 WI28 MRc5

25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶，5％血清，每瓶接種1.5X105細(xì)胞連傳3代，每代血清濃度和接種細(xì)胞數(shù)相同，每代培養(yǎng)7天，每
代接種二個(gè)細(xì)胞瓶，36℃±2℃培養(yǎng)。以同樣條件用已知參考血清進(jìn)行平行培養(yǎng)。每代收獲細(xì)胞計(jì)數(shù)，計(jì)算每批待
檢血清與參考血清的相對(duì)生長(zhǎng)率（RGR）。

RGR＝（試驗(yàn)血清每瓶細(xì)胞平均數(shù)/ 參考血清每瓶細(xì)胞平均數(shù)） X100％