細(xì)胞凍存液的配置以及凍存步驟

凍存液先關(guān)鍵在于冷凍保護(hù)劑，一般常用DMSO此類滲透性保護(hù)劑，一般是以9份小牛血清或細(xì)胞培養(yǎng)液與1份的DMSO混合而成，現(xiàn)配現(xiàn)用或配置后放入普通冰箱冰盒內(nèi)冷凍保存，使用前于室溫水浴融化。關(guān)鍵在于DMSO的終濃度為10％，對于普通細(xì)胞來說，小牛血清濃度似乎高點越好，但沒有這個必要，用細(xì)胞培養(yǎng)液即可。

細(xì)胞凍存
1.預(yù)先配制凍存液：10 % DMSO + 90%胎牛血清，4℃冰箱保存預(yù)冷；
2.用胰酶對細(xì)胞進(jìn)行消化：倒去培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基或用槍小心吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基，PBS沖洗兩次，用胰酶消化細(xì)胞（盡可能溫和）；
3.再次用*培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞，將預(yù)冷的凍存液加入消化*的細(xì)胞中，用滴管輕輕吹打混勻。
4.在每支凍存管中加入1ml細(xì)胞液，密封后標(biāo)記凍存細(xì)胞名稱和凍存日期。
5.凍存步驟的細(xì)致直接關(guān)系到細(xì)胞復(fù)蘇時的活力，如果有程序降溫器（放在-80℃冰箱過*，放入液氮罐）好；或者可以在4℃，2h；然后轉(zhuǎn)到-20℃，2h；-80℃，2h；放入液氮罐。

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