ELISA試劑盒新手入門的使用說(shuō)明技巧

方法原理
  1.雙抗體(原)夾心法：檢測(cè)抗原(體)的常見(jiàn)方法，應(yīng)用針對(duì)抗原兩個(gè)不同決定族的兩種單抗分別作為固相載體和酶標(biāo)抗體檢測(cè)溶液中的抗原(適用于二價(jià)以上抗原，不能測(cè) 小分子半抗原)。
  2.間接法：檢測(cè)抗體的方法，利用酶標(biāo)記的抗抗體(第二抗體)檢測(cè)已與固相抗原結(jié)合的抗體。
  3.競(jìng)爭(zhēng)法：檢測(cè)抗原或小分子半抗原、抗體，以測(cè)抗原為例，使待測(cè)抗原和酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)與固相抗體結(jié)合，結(jié)果如待測(cè)抗原含量越多，與固相抗體結(jié)合的酶標(biāo)抗原就越少，顯色越淺，二者呈負(fù)相關(guān)。
◎操作注意
  ① 使用干凈的塑料容器配置洗滌液，使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
  ② 洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
  ③ 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
ELISA試劑盒質(zhì)控分析
  1.人員培訓(xùn)內(nèi)容包括：①檢驗(yàn)項(xiàng)目的基本原理(ELISA試劑盒原理)；②熟悉檢測(cè)技巧，了解易出差錯(cuò)的環(huán)節(jié)及難點(diǎn)；熟悉檢測(cè)試劑性能(包括試劑盒組成，包被片段及其組成)；③熟悉檢測(cè)儀器的原理及性能;掌握數(shù)據(jù)處理的能力和質(zhì)量控制知識(shí)；④某些特殊項(xiàng)目的檢測(cè)如抗HIV等需經(jīng)有關(guān)部門組織的專門培訓(xùn)班，考試合格后持證上崗。
  2.基本了解
    ① 1971年Engvall等人把免疫組化的EIA技術(shù)應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)發(fā)展為ELISA試劑盒技術(shù)。
    ② 特點(diǎn)：ELISA試劑盒在固相表面組裝免疫活性物質(zhì)形成"免疫吸附劑"。
    ③ 酶標(biāo)記免疫活性物質(zhì)，進(jìn)行信號(hào)放大；
    ④ 有二步溫育反應(yīng)二次洗滌過(guò)程；
    ⑤ 靈敏度特異性相對(duì)較高。
    ⑥ 局限性：只能檢測(cè)到ng水平
    ⑦ 精密度差(批內(nèi)CV15-20%)；

 ATG16A  整合素αVβ1抗體
 ATG18/WIPI1  整合素αM/巨噬細(xì)胞表面分子抗體
 ATG3  整合素αL抗體
 ATG4A  整合素αE抗體
 ATG4C  整合素α7抗體
 ATG4D  整合素α6抗體
 ATG7  整合素α5抗體
 ATG8/GABARAPL2  整合素α4抗體
 ATG9A  整合素α4β7抗體
 ATG9B  整合素α3抗體
 ATGL/PEDFR  整合素α3β1抗體
 ATH III  整合素α2抗體
 ATM  整合素α1抗體
 ATP citrate lyase  整合素alpha E2 抗體
 ATP1b2/Na+K+ATPase  真核延伸因子激酶2抗體
 ATP2c1  真核啟動(dòng)因子2α抗體
 ATP4B  真核翻譯延長(zhǎng)因子2抗體
 ATP5J  真核翻譯起始因子4G抗體
 ATP7A  真核翻譯起始因子4E抗體
 ATP7B  真核翻譯起始因子4B抗體
 ATRN  真核翻譯起始因子3H抗體
 ATXN1  真核翻譯起始因子3F抗體
 AU1 tag  真核翻譯起始因子3A抗體
 AU5 tag  粘著斑激酶抗體
 Aurora A/ARK-1  粘膜血管定居因子抗體
 Aurora A/B/C  粘膜相關(guān)上皮趨化因子28抗體
 Aurora B/STK-1  粘附相關(guān)激酶抗體
 Aurora C  粘附分子相關(guān)蛋白a1抗體
 AVEN  粘蛋白-5B抗體
 AVPR2  粘蛋白-4抗體
 Axin1  粘蛋白-3抗體
 AXL  粘蛋白-2/上皮膜抗原2抗體
 B7-1/CD80  粘蛋白-1/上皮膜抗原抗體
 B7-DC/CD273  增殖細(xì)胞核抗原抗體
 B7-H1/CD274  增殖細(xì)胞核抗原抗體
 B7H4  增殖細(xì)胞核抗原抗體
 BAAT  增殖細(xì)胞核抗原抗體
ELISA試劑盒 BACE1/ASP2  增殖潛能相關(guān)蛋白抗體
 BACH1/BRIP1  增食欲素-A/欲激素A
 Bad  增生肉蛋白1抗體
 Bad  造血細(xì)胞磷酸酶抗體
 BADH2  造血細(xì)胞激酶抗體