蛋白酶K的作用及使用方法

白酶K，是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶，從林伯氏白色念球菌中純化得到，它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵。由于蛋白酶K具有降解天然蛋白質(zhì)的能力，因此多用于生物樣品中蛋白質(zhì)的一般降解；其消化過(guò)程中通常加入EDTA以抑制依賴于mg2+的核酸酶的作用。蛋白酶K的一般工作濃度是50-100μg/ml。在較廣的pH范圍內(nèi)(pH 4-12.5)均有活性。

蛋白酶K可替代 DEPC 處理 RNA 抽提用的離心管和槍頭，實(shí)現(xiàn)滅活 RNase A 的目的，也用于處理 RNase-Free的水。充分降解組織或細(xì)胞中蛋白質(zhì)分子，以達(dá)到釋放和萃取高質(zhì)量核酸的輔助試劑。用于質(zhì)粒或基因組DNA、RNA的分離以及蛋白多肽印跡實(shí)驗(yàn)。

值得注意的是，蛋白酶K在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的處理,它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用,以增加探針與靶核酸結(jié)合的機(jī)會(huì),提高雜交信號(hào).但蛋白酶K的濃度過(guò)高、消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或孵育溫度過(guò)高時(shí),都會(huì)對(duì)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)有一定的破壞,導(dǎo)致組織切片的脫落,細(xì)胞核的消失,從而影響雜交結(jié)果.

白酶K的使用方法

孵育溫度為5565℃，理想孵育溫度為58℃；孵育時(shí)間為15分鐘48小時(shí)，理想孵育時(shí)間為2小時(shí)。

蛋白酶K的配制

20mg/ml蛋白酶K配制標(biāo)準(zhǔn)(proteinase K)：將200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中，輕輕搖動(dòng)，直蛋白酶K*溶解。不要渦旋混合，加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20℃。

蛋白酶K的保存

保存在-20℃冰箱里，避免反復(fù)凍融，有效期為12個(gè)月。