常見問題	解決對策及注意事項(xiàng)
兩快玻璃板之間灌膠,膠總是不平	玻璃沒有洗干凈，應(yīng)該要洗得非常干凈
	過硫酸銨和TEMED的加量不合適，加量相對較多，凝膠凝固過快，也會造成膠不平現(xiàn)象
	加完試劑以后沒有很好的搖勻，導(dǎo)致有些部位的聚合劑濃度過高，聚合相對較快造成膠不平
膠總是漏	避免玻璃邊緣（與膠條接觸處）破損
	膠條一定要干，跑完電泳后，膠條就放在實(shí)驗(yàn)臺上晾著。下面的膠條注意不要老化，如果有裂紋的話用保鮮膜墊在上面，也可以有效防止漏膠
	將兩塊玻板擺放*對齊，底部處于同一個(gè)平面
膜上有明顯氣泡	操作時(shí)將氣泡*排除
膜上有明顯氣泡	靠膜一側(cè)的濾紙應(yīng)鋪平
特異性低	優(yōu)化一抗
	提高一抗和二抗的稀釋度
	降低SDS-PAGE中蛋白的上樣量
背景高	優(yōu)化封閉液
	優(yōu)化洗滌緩沖液，增加洗滌次數(shù)
	減少曝光時(shí)間
較低的信號	優(yōu)化一抗
	濃縮樣品
	選擇更高敏感度的發(fā)光底物
條帶跑得比正常的窄	可能因?yàn)槟z凝的不均勻，聚合的不是很好，灌膠的時(shí)候盡量混勻
	可能是樣品的問題，如果鹽濃度較高，便會擠壓其它條帶，致使條帶寬窄不一，由于同樣的原因，樣品在凝膠中的速度會很慢，造成條帶走的較慢
	可能是系統(tǒng)的ph出了問題，有可能是電極緩沖液，也有可能是凝膠緩沖液，更新緩沖液。
條帶呈“微笑”和“倒微笑”效果	"微笑"是因?yàn)楣嗄z的時(shí)候冷卻不均勻，中間部分冷卻不好，導(dǎo)致凝膠中的分子有不同的遷移率所致。
條帶呈“微笑”和“倒微笑”效果	“倒微笑“現(xiàn)象常常是由于垂直電泳時(shí)電泳槽的裝置不合適引起的，特別是當(dāng)凝膠和玻璃板組成的三明治底部有氣泡或靠近隔片的凝膠聚合不*便會產(chǎn)生這種現(xiàn)象
凝膠腫脹或卷曲	注意轉(zhuǎn)膜之前，切割下來的凝膠一定要在轉(zhuǎn)膜緩沖液中浸泡平衡5-10分鐘，要含有20%的甲醇。

WB注意事項(xiàng)

1）濾紙、膠、膜之間的大小，一般是濾紙>=膜>=膠。

2）濾紙、膠、膜之間千萬不能有氣泡，氣泡會造成短路。

3）因?yàn)镈EPF膜的疏水性，膜必須先在甲醇中*浸濕。而且在以后的操作中，膜也必須隨時(shí)保持濕潤（干膜法除外）。

4）濾紙可以重復(fù)利用，上層濾紙（靠膜）內(nèi)吸附有很多轉(zhuǎn)移透過的蛋白質(zhì)，所以上下濾紙一定不能弄混，在不能分辨的情況下，可以將靠膠濾紙換新的。

5）轉(zhuǎn)移時(shí)間一般為1.5 小時(shí)，( 1mA-2mA/cm2，10% gel)，可根據(jù)分子量大小調(diào)整轉(zhuǎn)移時(shí)間和電流大小。

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