干細(xì)胞的原代提取

胚胎干細(xì)胞 
免疫學(xué)法是較為常用的分離方法，它可選擇性地殺死囊胚外層的滋養(yǎng)層細(xì)胞，而僅保留ICM。它的原理是先將胚泡與抗小鼠的血清共同孵化一段時(shí)間后，然后加入補(bǔ)體，在補(bǔ)體的作用下，外層的滋養(yǎng)細(xì)胞發(fā)生溶解，而ICM則不受影響。

神經(jīng)干細(xì)胞 
目前，神經(jīng)干細(xì)胞的分離方法主要有三種：無(wú)血清培養(yǎng)基自然篩選法、流式細(xì)胞術(shù)分選法、免疫磁珠分選法。
無(wú)血清培養(yǎng)基自然篩選法是迄今應(yīng)用為廣泛，也是簡(jiǎn)單和容易操作且行之有效的方法。其原理是利用特殊的培養(yǎng)基使成熟的神經(jīng)細(xì)胞無(wú)法較長(zhǎng)時(shí)間地成活，而分離篩選出能夠在該培養(yǎng)條件下存活并繁殖的神經(jīng)干細(xì)胞群體。 

步驟： （1）取胎腦； 
             （2）用吸管吹吸使細(xì)胞分散均勻；
             （3）加小鼠神經(jīng)干*培養(yǎng)基培養(yǎng)。

脂肪間質(zhì)干細(xì)胞 
分離培養(yǎng)脂肪干細(xì)胞主要是通過(guò)膠原酶進(jìn)行消化，獲得細(xì)胞懸液。分離培養(yǎng)大鼠脂肪間質(zhì)干細(xì)胞的大致步驟如下：
        （1）取腹股溝處脂肪，充分剪碎；
        （2）加入膠原酶，將其轉(zhuǎn)移離心管中進(jìn)行消化30分鐘，加入培養(yǎng)基終止消化；
        （3）離心，大鼠脂肪間質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基重懸，接種培養(yǎng)瓶中。

骨髓間質(zhì)干細(xì)胞 
目前常用的分離MSC的方法有密度梯度離心法和全骨髓貼壁法。全骨髓貼壁法的原理是根據(jù)間質(zhì)干細(xì)胞在低血清培養(yǎng)基中有貼壁優(yōu)勢(shì)特性，定期換液除去不貼壁細(xì)胞，從而達(dá)到純化與擴(kuò)增間質(zhì)干細(xì)胞的目的。 
步驟 : （1）取大鼠股骨和脛骨，以*培養(yǎng)基沖洗股骨和脛骨骨髓，轉(zhuǎn)移離心管中，離心，去上清；
           （2）大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基重懸，接種培養(yǎng)； 
           （3）原代培養(yǎng)36h全液量換液，去除未貼壁的造血細(xì)胞，以后每3天換液一次，直到細(xì)胞80-90融合傳代。