木瓜蛋白酶活性測(cè)定

木瓜蛋白酶（Papain）是一種蛋白水解酶，又稱木瓜酶。是利用未成熟的番木瓜（Carica papaya）果實(shí)中的乳汁，采用現(xiàn)代生物工程技術(shù)提煉而成的生物酶制品。下面來詳細(xì)介紹一下木瓜蛋白酶活性測(cè)定的方法。

木瓜蛋白酶活性測(cè)定：（僅供參考）

木瓜蛋白酶活性測(cè)定原理

木瓜蛋白酶能使N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯（底物）水解而釋出N-苯甲酰-L-精氨酸，其釋出量可用氫氧化鈉液滴定，以此確定酶活力。

酶活單位

在25℃下，每分鐘內(nèi)能催化分解1umol底物的酶量，稱為1單位。

試液制備

1、底物溶液：準(zhǔn)確稱取N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯鹽酸鹽1.42g，加10mmol/LEDTA、50mmol/L半胱氨酸液2.6mL，加適量水，用0.1mol/L氫氧化鈉液調(diào)節(jié)pH6.2，后定容50.0mL。

2、待測(cè)酶液：取試樣用水稀釋適當(dāng)濃度，并調(diào)節(jié)pH6.2。

方法

25℃恒溫條件下，取25mL燒杯裝在pH自動(dòng)滴定儀上，加底物溶液3.75mL、3mol/L氯化鈉溶液2.50mL、重蒸餾水1.25mL，混合后加入待測(cè)酶液后立即計(jì)時(shí)，用0.1mol/L氫氧化鈉在電磁攪拌下連續(xù)滴定以保持pH6.2，記下每分鐘所耗0.01mol/L氫氧化鈉毫升數(shù)。同時(shí)進(jìn)行空白校正。按下式計(jì)算木瓜蛋白酶的活力P（單位/mg）：

P =C·ΔV·1000/W

式中：c：氫氧化鈉液的濃度，mol/L；ΔV：每分鐘消耗氫氧化鈉液的體積減去空白值；W：反應(yīng)液中木瓜蛋白酶的質(zhì)量，mg。

木瓜蛋白酶科研應(yīng)用

木瓜蛋白酶可用于細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，在準(zhǔn)備細(xì)胞培養(yǎng)液（cellculture）的*步中被用于分離細(xì)胞。用酶處理小組織塊10分鐘后，就可以將連接細(xì)胞的細(xì)胞外基質(zhì)打斷；然后再用蛋白酶抑制劑來停止反應(yīng)，防止木瓜蛋白酶進(jìn)一步裂解細(xì)胞本身；后用Pasteurpipette將組織塊打散為單細(xì)胞懸浮液。在免疫學(xué)中，木瓜蛋白酶可被用于將免疫球蛋白（即抗體）的Fc片段（可結(jié)晶）和Fab片段（抗原結(jié)合）切割開。

木瓜蛋白酶的活性中心含半胱氨酸，屬于巰基蛋白酶，它具有酶活高、熱穩(wěn)定性好、天然衛(wèi)生安全等特點(diǎn)，因此在食品、醫(yī)藥、飼料、日化、皮革及紡織等行業(yè)得到廣泛應(yīng)用。以上就是的方法，大家都學(xué)會(huì)了嗎？