總結(jié)實驗室常用染色液的制備方法

染色液是實驗室中常用的試劑之一，分為天然染液和人工染料，也分堿性染料和酸性染料，以下來詳細介紹一下實驗室常見染色液的配制。
⒈ 碘-碘化鉀（I2-KI）溶液 能將淀粉染成藍紫色，蛋白質(zhì)染成黃色，也是植物組織化學測定的重要試劑。 
配方：碘化鉀2g ；蒸餾水300ml ； 碘1g 
先將碘化鉀溶于少量蒸餾水中，待全溶解后再加碘，振蕩溶解后稀釋300mL，保存在棕色玻璃瓶內(nèi)。用時可將其稀釋2-10倍，這樣染色不致過深，效果更佳。 
⒉ 蘇丹Ⅲ（sudanⅢ或Ⅳ）能使木栓化、角質(zhì)化的細胞壁及脂肪、揮發(fā)油、樹脂等染成紅色或淡紅色，是的脂肪染色液。 
配方：（1）蘇丹III或蘇丹Ⅳ干粉 ； 95％酒精10ml ； 過濾后再加入10ml甘油 
（2）先將蘇丹III或IV溶解在50ml丙酮中，再加入70%酒精50ml。 
（3）蘇丹III 70%乙醇的飽和溶液。 
⒊ 1％醋酸洋紅（aceto carmine） 酸性染料，適用于壓碎涂抹制片，能使染色體染成深紅色，細胞質(zhì)成淺紅色。 
配方：洋紅1g ； 45％醋酸100ml 
煮沸2h左右，并隨時注意補充加入蒸餾水到原含量，然后冷卻過濾，加入4％鐵明礬溶液1～2滴（不能多加，否則會發(fā)生沉淀），放入棕色瓶中備用。 
⒋ 改良苯芬品紅染色液（Carbol fuchsine） 核染色劑。 
配制步驟： 先配成三種原液，再配成染色液。 
原液A：3g堿性品紅溶于100ml 70％酒精中。 
原液B：取原液A10ml加入到90ml 5％石炭酸水溶液中。 
原液C：取原液B 55ml，加入6ml冰醋酸和6ml福爾馬林（38％的甲醛）。 
（原液A和原液C可長期保存，原液B限兩周內(nèi)使用） 
染色液：取C液10～20ml，加45％冰醋酸80～90ml，再加山梨醇1~，配成10％～20％濃度的石炭酸品紅液，放置兩周后使用，*（若立即用，則著色能力差）。 
適用范圍：適用于植物組織壓片法和涂片法，染色體著色深，保存性好，使用2～3年不變質(zhì)。山梨醇為助滲劑，兼有穩(wěn)定染色液的作用，假如沒有山梨醇也能染色，但效果較差。 
⒌ 中性紅（neutral red）溶液 用于染細胞中的液泡，可鑒定細胞死活。 
配方：中性紅 ；蒸餾水100ml 
使用時再稀釋10倍左右。 
⒍ 曙紅Y（伊紅，eosin Y）酒精溶液 常與蘇木精對染，能使細胞質(zhì)染成淺紅色，起襯染作用。 
配方：曙紅 ； 95％酒清100ml 
也常用于95％酒精脫水時，加入少量曙紅溶液，其目的是在包埋、切片、展片、鏡檢時便于識別材料。 
⒎ 釕紅（ruthenium red）染液 釕紅是細胞胞間層專性染料，其配后不易保存，應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配。 
配方：釕紅5～10mg ； 蒸餾水25-50ml 
⒏ 龍膽紫（gentian violet） 為酸性染料，適用于細菌涂抹制片。 
配方：龍膽紫0.2~1 g ；蒸餾水100ml 
⒐ 苯胺蘭（aniline blue）溶液 為酸性染料，對纖維素細胞壁、非染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)、鞭毛等，尤其是染絲狀藻類效果好。還多用于與真曙紅作雙重染色，對于高等植物多用于與番紅作雙重染色。 
配方：苯胺蘭1 g ； 35％或95％酒精100ml 
⒑ （phloroglucin）溶液用于測定木質(zhì)素。 
配方：5g ； 95％酒精100ml 
注：此溶液呈黃褐色即失效。 
⒒ 橘紅G（orange G）酒精溶液 為酸性染料，染細胞質(zhì)，常作二重或三重染色用。 
配方：橘紅G 1g ； 95％酒精100ml 
⒓ 番紅（safranin O）為堿性染料，適用于染木化、角化、栓化的細胞壁，對細胞核中染色質(zhì)、染色體和花粉外壁等都可染成鮮艷的紅色。并能與固綠、苯胺蘭等作雙重染色，與橘紅G、結(jié)晶紫作三重染色。 
配方：（1）番紅水溶液番紅0.1或1 g ；蒸餾水100ml 
（2）番紅酒精溶液番紅0.5或1 g ；50％（或95％）酒精100ml 
（3）苯胺番紅酒精染色液 
甲液 番紅5 g +95％酒精50ml 
乙液 苯胺油20ml +蒸餾水450ml 
將甲、乙二溶液混合后充分搖均勻，過濾后使用。 
⒔ 固綠（fast green）又稱快綠溶液。為酸性染料，能將細胞質(zhì)，纖維素細胞壁染成鮮艷綠色，著色很快，故要很好的掌握著色時間。 
配方：（1）固綠酒精液固綠0.1 g ； 95％酒精100ml 
（2）苯胺固綠酒精液固綠 1 g ；* 100ml ；苯胺油 4ml 
配后充分搖勻，過濾后使用。現(xiàn)配現(xiàn)用效果好。 
⒕ 蘇木精（hematoxylin）染液蘇木精是植物組織制片中應(yīng)用廣的染料，是蘇木科植物蘇木的心材提取出來的。它是很強的細胞核染料，而且可以分化出不同顏色。配方很多，現(xiàn)舉海登漢氏（Heidenhain's）蘇木精染色液，又稱鐵礬蘇木精染色液。 
配方：甲液（媒染劑）： 硫酸鐵銨（鐵明礬）2-4g ；蒸餾水100ml 
（必須保持新鮮，好臨用之前配制） 
乙液（染色劑）：蘇木精 0.5-1g ；95％酒精 10ml；蒸餾水 90ml 
配制步驟：（1）將蘇木精溶于酒精中，瓶口用雙層紗布包扎，使其充分氧化（通常在室內(nèi)放置兩個月后方可使用）。（2）加入蒸餾水，塞緊瓶口，置冰箱中可長期保存。 
切片需先經(jīng)甲液媒染，并充分水洗后才能以乙液染色，染色后經(jīng)水稍洗再用另一瓶甲液分色適度。 
鐵礬蘇木精染液為細胞學上染細胞核內(nèi)染色質(zhì)好的染色劑，但要注意甲液與乙液在任何情況下決不能混合。 
⒖亞甲基藍染液 常用于細菌、活體細胞等的染色。 
取亞甲基藍，溶于100ml蒸餾水中即成。 
⒗詹納斯綠B（Janus green B）染色液 
將 綠溶于100ml蒸餾水，配成飽和水溶液。用時需稀釋。稀釋的倍數(shù)應(yīng)視材料不同而異。 
⒘硫堇染色液 
取克硫堇(也稱勞氏青蓮或勞氏紫)粉末，溶于100ml蒸餾水中，即可使用。使用此液時，需要用微堿性自來水封片或用1%NaHCO3水溶液封片，能成多色反應(yīng)。 
18.黑色素液 
水溶性黑素10g，蒸餾水100mL，甲醛(福爾馬林)?？捎米髑v膜的背景染色。 
19.墨汁染色液 國產(chǎn)繪圖墨汁40mL，甘油2mL，液體石炭酸2mL。先將墨汁用多層紗布過濾，加甘油混勻后，水浴加熱，再加石炭酸攪勻，冷卻后備用。用作莢膜的背景染色。 
20.呂氏(Loeffier)美藍染色液 
A液：美藍(methylene blue,又名甲烯藍)，95%乙醇30mL; 
B液：。 
混合A液和B液即成，用于細菌單染色，可長期保存。根據(jù)需要可配制成稀釋美藍液，按1∶10或1∶100稀釋均可。 
21.革蘭氏染色液 
(1)結(jié)晶紫(cristal violet)液：結(jié)晶紫乙醇飽和液(結(jié)晶紫2g溶于20mL95%乙醇中)20mL，1%草酸銨水溶液80mL。將兩液混勻置24h后過濾即成。此液不易保存，如有沉淀出現(xiàn)，需重新配制。 
(2)蘆戈(Lugol)氏碘液：碘1g，KI 2g，蒸餾水300mL。先將KI溶于少量蒸餾水中，然后加入碘使之*溶解，再加蒸餾水300mL，即成。配成后貯于棕色瓶內(nèi)備用，如變?yōu)闇\黃色能使用。 
(3)95%乙醇：用于脫色，脫色后可選用以下(4)或(5)的其中一項復染即可。 
(4)稀釋石炭酸復紅溶液：堿性復紅乙醇飽液(堿性復紅1g，95%乙醇10mL，5%石炭酸90mL)10mL，加蒸餾水90mL。 
(5)番紅溶液：番紅O(safranine O，又稱沙黃O)，95%乙醇100mL，溶解后可貯存于密閉的棕色瓶中，用時取20mL與80mL蒸餾水混勻即可。 
以上染色液配合使用，可區(qū)分出革蘭氏染色陽性(G+ )或陰性(G- )細菌，前者藍紫色，后者淡紅色。 
22.齊氏(Ziehl)石炭酸復紅液：堿性復紅溶于95%乙醇10mL中為A液；溶液100mL為B液?；旌螦、B液即成。 
23.姬姆薩(Giemsa)染色液 
(1)貯存液：稱取姬姆薩粉，甘油33mL，甲醇33mL。先將姬姆薩粉研細，再逐滴加入甘油，繼續(xù)研磨，后加入甲醇，在56℃放置1-24h后即可使用。 
(2)應(yīng)用液(臨用時配制)：取1mL貯存液加19mLpH7.4磷酸緩沖液即成。也可以貯存液∶甲醇=1∶4的比例配制成染色液。 
24. 1%瑞氏(Wright's)染色液 
稱取瑞氏染色粉6g，放研缽內(nèi)磨細，不斷滴加甲醇(共600mL)并繼續(xù)研磨使溶解。經(jīng)過濾后染液須貯存一年以上才可使用，保存時間愈久，則染色色澤愈佳。 
以上就是一些目前實驗室中常用染色液的配置方法。