IPTG配制的方法及使用說(shuō)明

IPTG是一種作用*的誘導(dǎo)劑，不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定，因此被實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用。IPTG溶液的配制很簡(jiǎn)單：在8ml蒸餾水中溶解2g IPTG后，用蒸餾水定容10ml，用0.22μm濾器過(guò)濾除菌，分裝成1ml小份貯存于-20℃。

IPTG的使用方法：

先把IPTG配制成24mg/ml（100mM）的水溶液，并進(jìn)行過(guò)濾除菌后保存。然后在100ml的瓊脂培養(yǎng)基中，加入100μl的上述溶液、200μl的X-Gal（20?mg/ml的二甲基甲酰胺（DMF）溶液）和100μl的Amp（100mg/ml），制作成IPTG、X-Gal、Amp平板培養(yǎng)基。當(dāng)DNA片段插入pUC系列載體（或其他帶有l(wèi)acZ、Amp基因載體），然后轉(zhuǎn)化lacZ缺失細(xì)胞中后，涂布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培養(yǎng)基，可根據(jù)長(zhǎng)出菌體的藍(lán)白色，而方便地挑選出基因重組體（白色為具有DNA插入片段的基因重組體）。

選用IPTG作誘導(dǎo)物的原因

能誘導(dǎo)酶的合成，但又不被分解的分子,稱為安慰誘導(dǎo)物（gratuitousinducer）。?由于乳糖雖可誘導(dǎo)酶的合成，但又隨之分解，產(chǎn)生很多復(fù)雜的動(dòng)力學(xué)問(wèn)題，因此人們常用安慰誘導(dǎo)物來(lái)進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)。X-gal（5-溴-4-錄-3-吲哚-β-半乳糖苷）也是一種人工化學(xué)合成的半乳糖苷，可被β－半乳糖苷酶水解產(chǎn)生蘭色化合物，因此可以用作β－半乳糖苷酶活性的指示劑。IPTG和X-gal都被廣泛應(yīng)用在分子生物學(xué)和基因工程的工作中。

某些誘導(dǎo)物與自然的β-半乳糖苷酶相似，且不能?被酶分解，比如異丙基-β-D-硫代半乳糖苷，（isopropylthiogalactoside,IPTG）。不被細(xì)菌分不被細(xì)菌分解性質(zhì)穩(wěn)定，解性質(zhì)穩(wěn)定，它的濃度在實(shí)驗(yàn)中不會(huì)改變。復(fù)雜的動(dòng)力學(xué)問(wèn)題，便于研究。IPTG能在缺乏lacY基因下而有效地被運(yùn)送。半乳糖苷鍵中用硫代替了氧，失去了水解活性，半乳糖苷鍵中用硫代替了氧失去了水解活性，但硫代半乳糖苷和同源的氧代化合物與酶位點(diǎn)的親和力相同，雖不為β-半乳糖苷酶所識(shí)的親和力相同，IPTG雖不為半乳糖苷酶所識(shí)雖不為但它是lac基因簇十分有效的誘導(dǎo)物

基因簇十分有效的誘導(dǎo)物。但它是基因簇十分有效的誘導(dǎo)物。

IPTG是β–半乳糖苷酶的活性誘導(dǎo)物質(zhì)?；谶@個(gè)特性，當(dāng)pUC系列的載體DNA（或其他帶有l(wèi)acZ 基因載體DNA）以lacZ 缺失細(xì)胞為宿主進(jìn)行轉(zhuǎn)化時(shí)、或用M13噬菌體的載體DNA進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí)。