MTT配制以及注意事項

MTT全稱為3-（4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide，又稱噻唑藍(lán)。用于細(xì)胞增殖及細(xì)胞活性測定和對體外細(xì)胞的細(xì)胞毒性的測定。
MTT的原理
檢測原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臢（Zā）（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲臢（Zā），用酶標(biāo)儀在490nm波長處(英文說明書寫的是570nm）測定其光吸收值，在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。根據(jù)測得的吸光度值（OD值），來判斷活細(xì)胞數(shù)量，OD值越大，細(xì)胞活性越強（如果是測藥物毒性，則表示藥物毒性越?。?。
MTT配制方法
通常MTT配成的終濃度為5mg/ml，須用PBS（磷酸緩沖液）或生理鹽水做溶劑。（市面上一般MTT的包裝為100mg,250mg或1g）
1.對于100mg這樣的小包裝，廠家都是將MTT放入小管中的，建議不要再用天平稱量分裝，而應(yīng)該一次性將其全配制成溶液，如100mg用20m1PBS來溶解。
具體做法：
預(yù)先在50ml離心管(沒有的話，可用培養(yǎng)瓶替代)加入20m1PBS，從中先吸取500-1000u1PBS
裝入含MTT的小管中，吹打若十次后將其移入50ml離心管，然后再混勻?？梢灾貜?fù)幾次以使小管中的MTT不殘留于管內(nèi)。將MTT*混勻后，用0.22?um濾膜過濾以除去溶液里的細(xì)菌，分裝避光(避光袋或是黑紙、錫箔紙包住)可長期保存于-20度。按細(xì)胞培養(yǎng)板每孔需加10u1計算，一般每96孔板約擊1m1，所以分裝時可考慮每管分裝1ml。
2.對于大包裝，可按上述方法稱取一部分溶解，也有人將粉劑分裝在EP管里，用的時候現(xiàn)配，直接往培養(yǎng)板中加。
3.配制MTT時用PBS溶解，也有人用生理鹽水配，60度水浴助溶。PBS配方：NaCl?8g，
KCl0.2g，Na2HPO41.44g，KH2PO40.24g，調(diào)PH?7.4，定容1L。
注意事項：
1、在配制和保存的過程中，容器好用鋁箔紙包住。
2、配成的MTT需要無菌，MTT對菌很敏感。
3、MTT一般好現(xiàn)用現(xiàn)配，過濾后4度避光保存兩周內(nèi)有效，或配制成Smg/ml保存在-20
度長期保存，避免反復(fù)凍融，好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光以免分解。當(dāng)MTT變?yōu)榛揖G色時就不能再用。
4、MTT有致癌性，用的時候小心，有條件好帶那種透明的簿膜手套。