MTT實(shí)驗(yàn)原理

MTT是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法。MTT實(shí)驗(yàn)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無(wú)此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲瓚，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。
在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。根據(jù)測(cè)得的吸光度值(OD值)，來(lái)判斷活細(xì)胞數(shù)量，OD值越大，細(xì)胞活性越強(qiáng)(如果是測(cè)藥物毒性，則表示藥物毒性越小)。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測(cè)、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測(cè)定等。它的特點(diǎn)是靈敏度高、經(jīng)濟(jì)。
MTT通常用于.細(xì)胞增殖及細(xì)胞活性測(cè)定以及藥物(也包括其他處理方式如放射線照射)對(duì)體外培養(yǎng)的細(xì)胞毒性的測(cè)定。
缺點(diǎn)：由于MTT經(jīng)還原所產(chǎn)生的甲瓚產(chǎn)物不溶于水，需被溶解后才能檢測(cè)。這不僅使工作量增加，也會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響，而且溶解甲的有機(jī)溶劑對(duì)實(shí)驗(yàn)者也有損害。
注意事項(xiàng)：
1、在配制和保存的過(guò)程中，容器好用鋁箔紙包住。
2、配成的MTT需要無(wú)菌，MTT對(duì)菌很敏感
3、MTT一般好現(xiàn)用現(xiàn)配，過(guò)濾后4度避光保存兩周內(nèi)(個(gè)人曾做過(guò)4度避光保存4周的MTT溶液，效果仍然不錯(cuò))有效，或配制成5mg/ml保存在-20度長(zhǎng)期保存，避免反復(fù)凍融，好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光以免分解。當(dāng)MTT變?yōu)榛揖G色時(shí)就不能再用。
4、MTT有致癌性，用的時(shí)候小心,有條件好帶那種透明的簿膜手套.
通常，此法中的MTT濃度為5mg/ml。因此，可以稱(chēng)取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸緩沖液（PBS）或無(wú)酚紅的培養(yǎng)基中，用0.22μm濾膜過(guò)濾以除去溶液里的細(xì)菌，放4℃ 避光保存即可。在配制和保存的過(guò)程中，容器好用鋁箔紙包住