瑞氏染色的步驟

瑞氏染色是目前常用而又簡單的染色方法。瑞氏染液由酸性染料伊紅和堿性染料美藍(lán)組成的復(fù)合染料，溶于甲醇 ，后解離為帶正電的美藍(lán)和帶負(fù)電的伊紅離子。瑞氏染色的步驟是什么？為了觀察細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，識別各種細(xì)胞及異常變化，血涂片必須進(jìn)行染色。血涂片的各種染色方法大多是羅氏染色法衍變而來。目前常用瑞氏染色法。

    瑞氏染色的步驟

    瑞氏染液的配制：取瑞氏染料1.0g、甲醇600ml、甘油15ml。

    I液：將全部染料放入清潔干燥的乳缽中，先加少量甲醇慢慢地研磨(少半小時)，以使染料充分溶解，再加一些甲醇混勻，然后將溶解的部分倒入潔凈的棕色瓶內(nèi)，乳缽內(nèi)剩余的未溶解的染料，再加入少許甲醇細(xì)研，如此多次研磨，直染料全部溶解，甲醇用完為止。再加15ml甘油，密閉保存。

    說明：新鮮配制的染液偏堿，染色效果較差，經(jīng)在室溫下貯存一定時間，美藍(lán)逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)樘烨郆后方可使用，這一過程稱染料成熟。放置時間愈久，天青愈多，染色效果也就越好。但必須蓋嚴(yán)瓶口，以免甲醇揮發(fā)或氧化成甲酸。染液中也可加中性甘油3ml，防止甲醇揮發(fā)或氧化，同時也可使血細(xì)胞染色較清晰，但我們所用的甲醇必須純凈。

    II液：又稱磷酸鹽緩沖液(PH6.4-6.8)，包含磷酸二氫鉀0.3g，磷酸二氫鈉0.2g、蒸餾水加1000ml。配好后用磷酸鹽溶液校正PH，如無緩沖液可用新鮮蒸餾水代替。也可用蒸餾水代替。

    染色：

    ①血涂片自然干燥后，用蠟筆在兩端畫線，以防染色時染液外溢。隨后將玻片平置于染色架上，滴加染液3-5滴，使其蓋滿血涂片，大約1分鐘后，滴加等量或稍多的II液，用吸耳球輕輕混勻。

    ②沖洗：染色5-10分鐘用流水染液，待干。

    ③結(jié)果觀察，將干燥后的血涂片置顯微鏡下觀察。先用低倍鏡觀察血涂片，再用油鏡。

    瑞氏染色法就是用瑞氏染色液對細(xì)菌進(jìn)行染色。瑞氏染色的步驟中需要注意的是沖洗時應(yīng)以流水沖洗，不能先倒掉染液，以防染料沉著在血涂片上。沖洗時間不能過久，以防脫色。如血涂片上有染料顆粒沉積，可滴加甲醇，然后立即用流水沖洗。