RIPA裂解液的原理

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)對(duì)動(dòng)物細(xì)胞胞膜、胞漿、胞核成分均有較強(qiáng)裂解作用，RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、IP等。

RIPA裂解液的原理如下：

RIPA主要是從動(dòng)物組織和動(dòng)物細(xì)胞中抽取的可溶性蛋白。RIPA 組織/細(xì)胞裂解液是利用表面活性劑等來(lái)裂解細(xì)胞膜（包括核膜）。

索萊寶RIPA裂解液的使用方法

如發(fā)現(xiàn)RIPA有沉淀，請(qǐng)放室溫半小時(shí)或者常溫水浴使沉淀溶解。

根據(jù)使用量，取每1ml RIPA 加入10ul PMSF，使PMSF的終濃度為1mM?；靹騻溆?（PMSF現(xiàn)用現(xiàn)加）。 

1、樣品前處理： 

a)對(duì)于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。

b)對(duì)于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入 150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液，再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成50-100萬(wàn)細(xì)胞/管，然后再裂解。

c)對(duì)于組織樣品： 把組織剪切成細(xì)小的碎片。按照每20mg組織加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。 (如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿，直充分裂解。

2、后處理：

將裂解后的樣品10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

注意事項(xiàng) ：

強(qiáng)烈型裂解液，可以提取核蛋白，但在提取核蛋白的同時(shí)，也會(huì)將基因組一并釋放出來(lái)，造成細(xì)胞裂解液粘稠，此時(shí)可以直接加入蛋白上樣緩沖液，煮沸再離心，離心后直接上樣電泳；若想測(cè)定濃度，可入加少量 SDS（1%），煮沸后離心測(cè)濃度。本系列蛋白提取試劑所提取的白由于含有去污劑，所以不適合使用Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒，請(qǐng)選擇BCA法或者Lowry法檢測(cè)蛋白濃度。