微生物培養(yǎng)基的配制方法以及常見培養(yǎng)基的成分

微生物培養(yǎng)基是供微生物生長、繁殖、代謝的混合養(yǎng)料。微生物培養(yǎng)基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、無機鹽、生長素以及水分等。另外，培養(yǎng)基還應(yīng)具有適宜的pH值、一定的緩沖能力、一定的氧化還原電位及合適的滲透壓。下面我們來介紹一下基本微生物培養(yǎng)基的配制方法。

微生物培養(yǎng)基的配制

    溶化：

    一般應(yīng)放在玻璃器皿或搪瓷齊內(nèi).加入蒸餾水,隔水加熱以促其溶解,加熱時應(yīng)經(jīng)常攪拌,防止焦結(jié),待其溶解后補足水分.

    在使用干燥培養(yǎng)基時,先將蒸餾水按定量加入容器中,然后稱取一定量培養(yǎng)基干粉放入水中,靜置10—15min,攪拌,振蕩,或延長時間以促進(jìn)溶解,一般不要熱,必要時加熱,但時間不宜過長,溫度不宜過高,避免某些營養(yǎng)成分被破壞.

    校正酸堿度（調(diào)節(jié)pH）：

    培養(yǎng)基必須有適當(dāng)?shù)膒H.因此測定pH是培養(yǎng)基配制過程中的重要步驟之一,測定pH的標(biāo)準(zhǔn)溫度為25士2℃.調(diào)節(jié)pH可用無菌的1mol/l氫氧化鈉溶液或10%碳酸鈉溶液、1mol/l鹽酸溶液.當(dāng)調(diào)節(jié)緩沖液的pH時,宜用6mol/l磷酸或10mol/l氫氧化鉀溶液.滅菌后的pH會比滅菌前的pH升高或降低,一般高壓滅菌前培養(yǎng)基的pH會比終pH調(diào)高0.2左右,滅菌后基本合適.因此對培養(yǎng)基、緩沖液、試劑在滅菌前后的pH均進(jìn)行測定,并記下每次pH的測定結(jié)果,有助于積累數(shù)據(jù)考察每種培養(yǎng)基、緩沖液、試劑對滅菌程序的耐受性,從而指導(dǎo)滅菌前pH的調(diào)節(jié).干燥培養(yǎng)基一般已校正過pH,用時也必須再驗證.測定時,一般用指示劑滴入培養(yǎng)基觀察其顏色的變化,或用pH計校正,如與所需pH不符,可用以上的酸或堿液加以校正.調(diào)整pH后要加熱過濾,使培養(yǎng)基澄清.

    培養(yǎng)基的滅菌：

    培養(yǎng)基的滅菌多采用高壓蒸汽滅菌,各種培養(yǎng)基的滅菌時間和壓力,按其成分不同而定.普通培養(yǎng)基采用121℃、103.42kPa滅菌15min,但容器和裝量較大時,應(yīng)延長20min.含糖培養(yǎng)基115℃、68.85kPa滅菌30min.含糖、血清、雞蛋等培養(yǎng)基可用流動蒸汽及血清凝固器80—100℃、30min,連續(xù)3d,間歇滅菌.血清或組織液,采用低熱56—58水浴1h,連續(xù)5—6d滅菌,一些遇高溫即被破壞的物質(zhì)如尿素、腹水等,可用細(xì)菌過濾器,過濾除菌.高壓滅菌應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)程執(zhí)行,必須逐漸加熱,*排除滅菌器內(nèi)的空氣,再逐漸升壓保持預(yù)定的壓力和時間,達(dá)到全部殺滅微生物.以上的滅菌時間和溫度要經(jīng)過驗證確認(rèn),如不同類型培養(yǎng)基混合一起滅菌時宜采用115℃、68.85kPa滅菌30min為好。

    常見培養(yǎng)基的成分

    1 ．營養(yǎng)肉湯

    成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，蒸餾水1000mL，pH7.4。

    制法：按上述成分混合，溶解后校正pH，121℃高壓滅菌15min。

    2．營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基

    成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，瓊脂17g，蒸餾水1000mL，pH7.2。

    制法：將除瓊脂外的各成分溶解于蒸餾水中，校正pH，加入瓊脂，分裝于燒瓶內(nèi)，121℃，15min高壓滅菌備用。

    3．MRS培養(yǎng)基

    成分：蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母粉5g，K2HPO4??2g，檸檬酸二銨2g，乙酸鈉5g，葡萄糖20g，吐溫80 1mL，MgSO4 .7H2O 0.58g，MnSO4 4H2O 0.25g，（瓊脂15~20g），蒸餾水1000mL。

    制法：將以上成分加入到蒸餾水中，加熱使*溶解，調(diào)pH6.2~6.4，分裝于三角瓶中，121℃,滅菌15min。

    4．脫脂乳培養(yǎng)基

    成分：牛奶，蒸餾水。

    制法：將適量的牛奶加熱煮沸20~30min，冷卻，脂肪即可上浮。除去上層乳脂即得脫脂乳。將脫脂乳盛在試管及三角瓶中，封口后置于滅菌鍋中在108℃條件下蒸汽滅菌10~15min，即得脫脂乳培養(yǎng)基。

    5．培養(yǎng)基A

    成分：蛋白胨10.0g，酵母提取物1.0g，葡萄糖10.0g，NaCL5.0g，瓊脂15.0g，水1000mL。制法：將以上成分加入到蒸餾水中，加熱使*溶解，調(diào)pH7.0~7.2，分裝于三角瓶中，121℃，滅菌15min。

    6．PTYG培養(yǎng)基

    成分：胰胨Tryptone（Oxoid）5g，大豆蛋白胨5g，酵母粉（Oxoid）10g，葡萄糖10g，吐溫80 0 1mL，瓊脂15~20g，L-半胱氨酸鹽酸鹽0.05g，鹽溶液4mL。

    制法：將以上成分加入到蒸餾水中，加熱使*溶解，調(diào)pH6.8~7.0，分裝于三角瓶中，115℃滅菌30min。

    鹽溶液制備：無水氯化鈣0.2g，K2HPO4??1.0g，KH2PO4??1.0g，MgSO4 。7H2O 0.48g，NaCO3 10g，NaCL 2g，蒸餾水1000mL，溶解后備用。