細(xì)胞培養(yǎng)基的基本成分

細(xì)胞培養(yǎng)基的基本成分

         在一些較為復(fù)雜的培養(yǎng)液中還包括其它一些成分。如在雜交瘤技術(shù)中常用的DMEM 培養(yǎng)液，使用時(shí)還需要補(bǔ)加丙酮酸鈉（2-Mercaptoethanol，2-Me）。2-Me 對(duì)細(xì)胞生長有很重要的作用。有人認(rèn)為它相當(dāng)于胎牛血清，有直接刺激細(xì)胞增殖作用。2-Me的活性部分是硫氫基，其中一個(gè)重要作用是使血清中含硫的化合物還原成谷胱甘肽，能誘導(dǎo)細(xì)胞的增殖，為非特異性的激活作用。同時(shí)避免過氧化物對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的損害。另一個(gè)重要作用是促進(jìn)分裂原的反應(yīng)和DNA 合成，增加植物凝集素（PHA）對(duì)淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化作用，已廣泛應(yīng)用于雜交瘤技術(shù)，另外，也開始用于一些難以培養(yǎng)的細(xì)胞。2-Me 是一種小分子還原劑，極易氧化。分子量為78.13，純的2-Me 是一種無色有刺激味的液體，比重為1.110-1.120（Do20），常用終濃度為5×10^-5M。常配制成0.1M 的儲(chǔ)存液，用時(shí)每升培養(yǎng)液加0.5ml。
    液體培養(yǎng)基保存
    液體培養(yǎng)基應(yīng)于4℃冰箱避光保存，實(shí)驗(yàn)前放入37℃預(yù)熱。未加血清液體培養(yǎng)基有效期為12 個(gè)月。液體培養(yǎng)基中的L-谷氨酰胺會(huì)隨著儲(chǔ)存時(shí)間的延長而慢慢分解。如果細(xì)胞生長不良，可以再添加適量L-谷氨酰胺。
    干粉培養(yǎng)基保存
    4℃冰箱避光保存，有效期36 個(gè)月。
    血清
    細(xì)胞培養(yǎng)液中添加的血清有牛血清、馬血清、人血清等，其中牛血清是常用的血清，分為胎牛血清和新生小牛血清。胎牛血清是從母牛破腹取出的胎牛中分離出的血清，價(jià)格昂貴。新生小牛血清是從剛出生的尚未哺乳的小牛中分離出來的血清，如廠家能做到這一點(diǎn)，新生小牛血清的質(zhì)量與胎牛血清的質(zhì)量相差不大。如小牛出生后已哺乳，從這種小牛中取出的血清中可能含有較多的生物活性物質(zhì)，其質(zhì)量明顯不如前兩種。
    血清的質(zhì)量，種類及使用的濃度都有可能影響細(xì)胞的生長，而不同批次的血清支持細(xì)胞生長的能力也不同，尤其是對(duì)克隆細(xì)胞的生長，某些批次血清可能含有毒性或抑制細(xì)胞生長的物質(zhì)。因此，在購買大量血清之前，必須對(duì)血清支持細(xì)胞生長能力進(jìn)行檢測(cè)，然后再大量購買質(zhì)量好的同一批號(hào)的血清，并注意以下幾點(diǎn)：
    （1）需要長期保存的血清必須儲(chǔ)存于-20℃ – 70℃ 低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時(shí)間切勿超過1 個(gè)月。由于血清結(jié)冰時(shí)體積會(huì)增加約10％，因此，血清在凍入低溫冰箱前，必須預(yù)留一定體積空間，否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。
    （2）一般廠商提供的血清為無菌，無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物，則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾，切勿直接過濾血清。
    （3）瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法：-20℃ -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1 天。然后移入室溫，待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻（小心勿造成氣泡），使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍，這樣因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀。
    （4）熱滅活是指56℃, 30 分鐘加熱已*解凍的血清。加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻。此熱處理的目的是使血清中的補(bǔ)體成分（complement）滅活。除非必須，一般不建議作此熱處理，因?yàn)闊崽幚頃?huì)造成血清沉淀物顯著增多，而且還會(huì)影響血清的質(zhì)量。補(bǔ)體參與反應(yīng)有：細(xì)胞毒作用, 平滑肌細(xì)胞收縮, 肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺, 增強(qiáng)吞噬作用, 促進(jìn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞發(fā)生化學(xué)趨化和活化。
    （5）切勿將血清在37℃放置太久，否則血清會(huì)變得渾濁，同時(shí)血清中的有效成分會(huì)破會(huì)而影響血清質(zhì)量。
    （6）血清中的沉淀物
    絮狀物：主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成，這些絮狀物不會(huì)影響血清本身的質(zhì)量?？捎秒x心3000rpm, 5 分鐘去除，也可不用處理。
    顯微鏡下“小黑點(diǎn)”：經(jīng)過熱處理過的血清，沉淀物的形成會(huì)顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象“小黑點(diǎn)”，常誤認(rèn)為血清受污染。一般情況下，此小黑點(diǎn)不會(huì)影響細(xì)胞生長，但如果懷疑血清質(zhì)量，則應(yīng)立即停止使用，更換另一批號(hào)的血清。