藍(lán)白斑篩選中IPTG和X-gal的工作原理

細(xì)菌藍(lán)白斑篩選原理：IPTG為安慰型誘導(dǎo)物，可誘導(dǎo)β-半乳糖苷酶的產(chǎn)生，X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物，在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深藍(lán)色的物質(zhì)：5-溴-4-靛藍(lán)，有色物質(zhì)可使所在的菌落呈現(xiàn)藍(lán)色。但當(dāng)含有l(wèi)ac啟動(dòng)子的質(zhì)粒中插入了外源基因，則不能產(chǎn)生β-半乳糖苷酶，因此不能分解X-gal產(chǎn)生藍(lán)色底物，所在的菌落呈現(xiàn)白色（相對(duì)藍(lán)色），這樣的菌落才有可能是我們想要的菌株。藍(lán)白斑篩選減輕了在篩選陽性克隆菌落時(shí)的工作量。

使用濃度：IPTG濃度：50mg/ml；X-gal濃度：20mg/ml

直接涂板法：取IPTG溶液10l，X-gal溶液20l滴在培養(yǎng)基上，同時(shí)滴加50～100l無菌水或無菌LB，用涂布棒涂抹均勻，放表面無水后即可使用。

預(yù)制板：倒板時(shí)，在溫度降50℃后。每100mlLB中加入250l的IPTG溶液和500?l的X-gal溶液，混勻后制板即可。

注意：

1、X-gal不溶于水，用二甲基甲酰胺(DMF)溶解；

2、X-gal對(duì)光敏感，含有X-gal的平板應(yīng)該避光保存，在1～2周內(nèi)使用；

3、培養(yǎng)后藍(lán)白斑顯示不明顯可將平板放入4℃冰箱中，一段時(shí)間后藍(lán)白斑顯示會(huì)比較明顯，便于挑選。