基因組提取試劑盒真菌基因組DNA提取試劑盒

基因組提取試劑盒真菌基因組DNA提取試劑盒
貨號(hào)：D2300
規(guī)格：50T、100T
保存：室溫(15℃-25℃) 干燥保存，復(fù)檢期 12 個(gè)月，2℃-8℃保存時(shí)間更長(zhǎng) 。

產(chǎn)品說(shuō)明：
    真菌是具有真核和細(xì)胞壁的異養(yǎng)生物。種屬很多，已報(bào)道的屬達(dá) 1 萬(wàn)以上，種超過(guò) 10 萬(wàn)個(gè)。真菌通常又分為三類(lèi)，即酵母菌、霉菌和蕈菌（大型真菌） 。對(duì)于酵母菌和霉菌，可以用玻璃珠處理，而對(duì)于大型真菌，可直接用液氮研磨。經(jīng)過(guò)前期處理的菌液，用硅質(zhì)膜吸附，即可得到高純度的基因組。提取純化后的 DNA，可以直接用于 PCR/Real time-PCR，sequencing，Southern blot，mutant analysis，SNP 等下游應(yīng)用實(shí)驗(yàn)。

操作步驟：
    使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入無(wú)水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶體上的標(biāo)簽。所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心。
1、樣品的處理：
    1）對(duì)于酵母菌，取 1-2ml 培養(yǎng)好的菌液，離心收集，棄上清。加入 200ul 溶液 A，加入 20ul RNase A，再加入 100mg 玻璃珠，在高速振蕩器上振蕩，約 5-10min。
    2）霉菌(孢子也可相同處理)：取 50-100mg 菌絲，加 200ul 溶液 A，用玻璃研磨器適當(dāng)研磨分散菌絲，加入 20ul RNase A，再加入 100mg 玻璃珠，在高速振蕩器上振蕩，約 30min。
    3）大型真菌（如蘑菇等） ：稱(chēng)取 50-100mg 樣品，倒入適量的液氮，立即研磨重復(fù) 3 次，使樣品研成粉末（如無(wú)液氮， 可加 200ul 溶液 A 后用玻璃研磨器適當(dāng)研磨） ， 加 200ul 溶液 A， 加入 20ul RNase A， 再加入 100mg玻璃珠，在高速振蕩器上振蕩，約 5min。
2、 加入 20ul 10mg/ml 的蛋白酶 K， 充分混勻， 55℃水浴消化， 30min。 消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次， 12000rpm離心 2min。將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的離心管中。如有沉淀，可再次離心。
3、在上清中加入 200ul 溶液 B，充分混勻。如出現(xiàn)白色沉淀，可放 55℃水浴 5min，沉淀即會(huì)消失，不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如溶液未變清亮，說(shuō)明樣品消化不*，可能導(dǎo)致提取的 DNA 量少及不純，還有可能導(dǎo)致上柱后堵柱子，請(qǐng)?jiān)黾酉瘯r(shí)間。
4、再加入 200ul 無(wú)水乙醇，充分混勻，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，不影響 DNA 的提取，將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中，放置 2 分鐘。
5、12000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
6、向吸附柱中加入 700ul 漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇)，12000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
7、向吸附柱中加入 500ul 漂洗液，12000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
8、12000rpm 離心 2min，將吸附柱置于室溫或 50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會(huì)影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR 等。
9、將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加 50-200ul 經(jīng) 65℃水浴預(yù)熱的洗脫液，室溫放置5min，12000rpm 離心 1min。
10、離心所得洗脫液再加入吸附柱中，室溫放置 2min，12000rpm 離心 2min，即可得到高質(zhì)量的基因組DNA。

注意事項(xiàng):

1. 由于真菌種類(lèi)萬(wàn)千，對(duì)于一些特別難處理的真菌，可用液氮研磨，再用玻璃珠振蕩，蛋白酶K處理，一般都可以得到一定量的基因組DNA，如電泳檢測(cè)很弱，一般PCR都會(huì)有較好結(jié)果。
2. 若溶液A或溶液B中有沉淀，可在 55℃水浴中重新溶解。
3. 如果DNA提取量很少，可加長(zhǎng)玻璃珠處理時(shí)間，如果提取DNA成彌散短條帶，可減少玻璃珠處理時(shí)間。
4. 洗脫緩沖液的體積好不少于 50ul，體積過(guò)小會(huì)影響回收效率；洗脫液的pH值對(duì)洗脫效率也有影響，若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在 8.0 左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)此范圍)，pH值低于 7.0 會(huì)降低洗脫效率；DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防DNA降解。
5. DNA濃度及純度檢測(cè)：得到的基因組DNA片段的大小與樣品保存時(shí)間、操作過(guò)程中的剪切力等因素有關(guān)。回收得到的DNA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。DNA應(yīng)在OD 260 處有顯著吸收峰，OD 260 值為 1 相當(dāng)于大約 50 μg/ml雙鏈DNA、40 μg/ml單鏈DNA。OD 260/ OD 280 比值應(yīng)為 1.7-1.9，如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會(huì)偏低，因?yàn)閜H值和離子存在會(huì)影響光吸收值，但并不表示純度低。
6. 在確保樣品無(wú)誤的情況下，如經(jīng)過(guò)多次試驗(yàn)，都無(wú)法提出DNA，請(qǐng)將部分樣品寄我公司，我們代為摸索優(yōu)化條件，以使您的實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蛘＿M(jìn)行下去。

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基因組提取試劑盒真菌基因組DNA提取試劑盒訂購(gòu)說(shuō)明：

1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨，一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。 
2、部分非常用產(chǎn)品，需提前1－2日預(yù)訂，海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。 
3、部分產(chǎn)品價(jià)格會(huì)因貨期、批次等因素發(fā)生變化，若有變動(dòng)以訂貨當(dāng)日新價(jià)格為準(zhǔn)。 
4、每日訂單截止時(shí)間為16點(diǎn)整，部分城市可到17點(diǎn)整，因超過(guò)截止時(shí)間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請(qǐng)辦理完貨款后，將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。

運(yùn)輸說(shuō)明：

1、極低溫產(chǎn)品：極低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中加裝干冰運(yùn)輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來(lái)，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶(hù)的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
2、低溫產(chǎn)品：低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中加裝索萊寶冰袋運(yùn)輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來(lái)，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴(yán)實(shí)密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續(xù)一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶(hù)的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
3、常溫產(chǎn)品：常溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中無(wú)需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫(kù)房人員快速配貨，準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達(dá)您的手中。