雙縮脲法蛋白含量測(cè)定試劑盒 微量法

雙縮脲法蛋白含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
微量法
貨號(hào): BC3185
規(guī)格: 100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：
提取液：自備。根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水。
產(chǎn)品說(shuō)明：
樣本可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計(jì)算。此外，可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。
強(qiáng)堿性溶液中，雙縮脲與CuSO₄形成紫色絡(luò)合物；紫色絡(luò)合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，而與蛋白質(zhì)分子量及氨基酸成分無(wú)關(guān)，故可用來(lái)測(cè)定蛋白質(zhì)含量。該方法適用于蛋白質(zhì)濃度高的樣本，尤其是動(dòng)物材料。
技術(shù)指標(biāo)：
低檢出限：0.1718 mg/mL
線性范圍：0.25-12 mg/mL
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、離心機(jī)、移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
1、液體樣本：澄清無(wú)色液體樣本可以直接測(cè)定。
2、組織樣本：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）冰浴勻漿，10000rpm，4℃離心10min，取上清，即待測(cè)液。（動(dòng)物樣本常常需要稀釋）
3、細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。
二、測(cè)定步驟

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到540nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 空白管：取0.5mL EP管，加入40μL蒸餾水，200μL試劑一，混勻后室溫靜置15min，取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，540nm比色，記為A空白管。

3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取0.5mL EP管，加入40μL標(biāo)準(zhǔn)液，200μL試劑一，混勻后室溫靜置15min，取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，540nm比色，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

4. 測(cè)定管：取0.5mL EP管，加入40μL待測(cè)液，200μL試劑一，混勻后室溫靜置15min，取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，540nm比色，記為A測(cè)定管。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定1-2次。

注意事項(xiàng)：

1. 樣本蛋白濃度須在0.25~12mg/mL范圍內(nèi)，低于0.25mg/mL不能用此法，高于12mg/mL須做相應(yīng)稀釋。因此測(cè)定前用1~2個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)，確保蛋白濃度在0.25~12mg/mL范圍內(nèi)。

2. 如果吸光值大于0.44，則需要將樣本用蒸餾水稀釋后再測(cè)定。

3. 待測(cè)樣本蛋白提取可用生理鹽水、雙蒸水或不含蛋白的PBS提取。該法受硫酸銨、Tris緩沖液干擾，提取液中應(yīng)不含這些物質(zhì)；否則改用BCA蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒。

雙縮脲法蛋白含量測(cè)定試劑盒 微量法 雙縮脲法蛋白含量測(cè)定試劑盒 微量法