鼠尾膠原蛋白I型

鼠尾膠原蛋白I型
貨號 ：C8062
保存 ：4℃保存，切勿凍存，有效期為一年。
規(guī)格 ：10mg, 5mg/ml, 溶解于 0.006mol/L HAc, 無菌。

產(chǎn)品簡介 ：
    索萊寶鼠尾膠原蛋白 I 型(rattailtendon collagen type I)是通過 Birkedal-Hansen 的方法，通過醋酸抽提、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的。本公司鼠尾膠原蛋白可用于包被細胞培養(yǎng)器皿，培養(yǎng)一些在普通細胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細胞。也可用于制備三維膠，模擬真實的生長環(huán)境，使細胞在三維環(huán)境中生長。
    1，在使用索萊寶鼠膠原蛋白 I 型包被的細胞培養(yǎng)皿中檢查到 PC-12 細胞的貼壁和生長。
    2，在 1mg/ml 濃度以上，pH 為 7 左右時可形成具有一定強度的三維膠，檢查到 NIH-3T3 細胞在三維膠內(nèi)正常生長、PC-12 細胞在三維膠表面正常生長。

使用方法 ：
    1、細胞培養(yǎng)器皿的表面包被 推薦濃度： 1-5ug/cm 2
以包被濃度為 2 ug/cm 2 為例：用無菌 0.006mol/L(0.36g/L) 乙酸將膠原蛋白稀釋0.012mg/ml。
    按以下表格體積加到相應的培養(yǎng)器皿中：
表面積（cm 2 ,每孔或每皿）  加入 0.012mg/ml 膠原的體積( ul )
96 孔細胞培養(yǎng)板  0.3  50
24 孔細胞培養(yǎng)板  1.9  300
12 孔細胞培養(yǎng)板  3.8  600
6 孔細胞培養(yǎng)板  9.5  1580
35mm 細胞培養(yǎng)皿  8  1330
60mm 細胞培養(yǎng)皿  21  3500
100mm 細胞培養(yǎng)皿  55  9170
    確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面，開蓋在超凈臺上晾干。 也可以在室溫放置 1 小時后，用 PBS 洗 3-4次后直接使用。包被好的器皿在 4-25℃少可保存 3 個月以上的時間。
 

2、三維膠原的制備
    鼠尾膠原蛋白 I 型在濃度 1mg/ml 以上， pH 7 左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度 1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于 0.006mol/L 乙酸中，在成膠過程中需要加入 0.06×體積的 0.1mol/L NaOH 來中和。需要的溶液 （均需要無菌、 預冷） ： 10×PBS （可含 10 mg/L 的酚紅用于 pH 指示） 或 10×培養(yǎng)液 ， , 0.1mol/LNaOH，0.1mol/L 乙酸(一般不用)，雙蒸水
    A． 不含細胞的三維膠原的制備（以配制 1 毫升，1mg/ml 三維膠為例）：將 200ul 鼠尾膠原蛋白 I 型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中，加入 690ul H2O。然后加到 12ul 0.1mol/L NaOH 中（如果反過來把 12ul 0.1mol/LNaOH 加到膠原溶液中， 會由于 NaOH 不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)） ， 立即混勻。 再加入 100ul 10×PBS
或 10×培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后 pH 為 7 左右，如果 PBS 或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時需要用 pH 試紙測試)。將培養(yǎng)器皿在室溫(25 度左右)下放置 20 分鐘待膠凝固后，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是 10×PBS，使用前需要加入適當體積的細胞培養(yǎng)液預平衡。
     B．含細胞的三維膠原的制備（以配制 1 毫升，1mg/ml 三維膠為例）：準備好懸浮于培養(yǎng)液的細胞，并放置于冰浴中。 將200ul鼠尾膠原蛋白I型 (5mg/ml)加到12ul 0.1mol/L NaOH中 （如果反過來把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中，會由于 NaOH 不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻。再加入 23ul 10×PBS 或10×培養(yǎng)液，混勻(混勻后 pH 為 7 左右，如果 PBS 或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時需要用 pH 試紙測試)。加入 760ul 的細胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放置 20 分鐘待膠凝固后，加入適當體積的細胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

注意事項 ：
    鼠尾膠原蛋白 I 型在室溫下 pH 中性時可迅速成膠，在操作過程中要盡量保持低溫。

訂購說明：

1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨，一般情況下都能訂貨當日發(fā)貨。 
2、部分非常用產(chǎn)品，需提前1－2日預訂，海外期貨則需要提前3-6周預訂。 
3、部分產(chǎn)品價格會因貨期、批次等因素發(fā)生變化，若有變動以訂貨當日新價格為準。 
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5、請辦理完貨款后，將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。

運輸說明：

1、極低溫產(chǎn)品：極低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實驗保駕護航。
2、低溫產(chǎn)品：低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴實密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續(xù)一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實驗保駕護航。
3、常溫產(chǎn)品：常溫產(chǎn)品運輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫房人員快速配貨，準確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達您的手中