Annexin V PE/7-AAD 凋亡檢測試劑盒

Annexin V PE/7-AAD 凋亡檢測試劑盒

產(chǎn)品簡介：
細(xì)胞凋亡早期改變發(fā)生在細(xì)胞膜表面，這些細(xì)胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨酸（PS）從細(xì)胞膜內(nèi)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外，使 PS 暴露在細(xì)胞膜外表面。PS 是一種帶負(fù)電荷的磷脂，正常主要存在于細(xì)胞膜的內(nèi)面，在細(xì)胞發(fā)生凋亡時細(xì)胞膜上的這種磷脂分布的不對稱性被破壞而使PS 暴露在細(xì)胞膜外。Annexin V 具有易于結(jié)合到磷脂類如 PS 的特性，對 PS 有高度的親和性。因此，該蛋白可充當(dāng)一敏感的探針檢測暴露在細(xì)胞膜表面的 PS。PS 轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外不是凋亡所*的，也可發(fā)生在細(xì)胞壞死中。兩種細(xì)胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細(xì)胞膜是完好的，而細(xì)胞壞死在其早期階段細(xì)胞膜的完整性就破壞了。因此，可以采用 AnnexinV 與7-AAD 雙染的方法，通過流式檢測細(xì)胞早期凋亡。

操作步驟:

標(biāo)記的 Annexin V 可結(jié)合流式細(xì)胞儀用于檢測細(xì)胞外膜上的磷酯酰絲氨酸
1.用去離子水按 1:4 稀釋結(jié)合緩沖液（4ml 結(jié)合緩沖液+12ml 去離子水）；
2.用 4℃預(yù)冷的 PBS 洗細(xì)胞兩次，用 250ul 結(jié)合緩沖液重新懸浮細(xì)胞，調(diào)節(jié)其濃度為 1× 106/ml；
3.取 100μl 的細(xì)胞懸液于 5ml 流式管中，加入 5μl Annexin V/PE 和 10μl 7AAD 溶液；
4.混勻后于室溫避光孵育 15 分鐘；
5.在反應(yīng)管中加 400μl PBS，流式細(xì)胞儀（FACS）分析

（注：消化細(xì)胞時不能用含 EDTA 的胰酶）

Annexin V PE/7-AAD 凋亡檢測試劑盒