嘌呤霉素

嘌呤霉素
貨號：P8230
規(guī)格：25mg/100mg
英文名稱 : Puromycin 
CAS : 58-58-2 
分子式 : C22H29N7O5·2HCl 
分子量 : 544.43 
儲存條件 : -20℃ 
純度 : ≥98%(TLC) 
單位 : 支 
外觀（性狀） : 白色或白中帶有黃色的粉末

• 別名 : 二鹽酸嘌呤霉素；鹽酸鹽
• 危險代碼 : R:22

說明：蛋白質(zhì)合成抑制劑。抑制細菌、藻類原生物和哺乳動物細胞生長。

     （Puromycin）是由白黑鏈霉菌（Streptomyces alboniger）發(fā)酵代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素，通過抑制蛋白質(zhì)合成而殺死革蘭氏陽性菌，各種動物和昆蟲細胞。某種特殊情況下有效作用大腸桿菌。作用機制在于是氨酰-tRNA分子3’末端的類似物，能夠與核糖體的A位點結(jié)合并摻入到延伸的肽鏈中。同A位點結(jié)合后，不會參與隨后的任何反應，從而導致蛋白質(zhì)合成的提前終止并釋放出C-末端含有的不成熟多肽。

     產(chǎn)生菌Streptomyces alboniger內(nèi)發(fā)現(xiàn)的pac基因編碼N-乙酰轉(zhuǎn)移酶（PAC），賦予機體對產(chǎn)生抗性。這一特性如今普遍應用于篩選特定攜帶pac基因質(zhì)粒的哺乳動物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株。

    在細胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選中的普遍應用與慢病毒載體的特性有關(guān)，現(xiàn)在商業(yè)化的慢病毒載體多數(shù)都攜帶pac基因。在某些特定情況下，亦可以用來篩選轉(zhuǎn)化攜帶pac基因質(zhì)粒的大腸桿菌菌株。

     抗菌機理在于作用于細菌核糖體30S亞單位，抑制細菌蛋白質(zhì)的合成而發(fā)揮抗菌作用；也可導致mRNA遺傳三連體密碼閱讀錯誤， 翻譯形成無意義的蛋白質(zhì)；也可依靠離子吸附于菌體表面，造成細胞膜損傷。導致膜通透性增加，使胞內(nèi)一些重要生命物質(zhì)外漏，使細菌死亡。

   溶解性：溶于水，參考濃度50mg/ml。

使用方法

1.建議使用濃度

     哺乳動物細胞：1-10 μg/mL，佳濃度需要殺滅曲線來確定；

     大腸桿菌：LB瓊脂培養(yǎng)基篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)化pac基因的大腸桿菌，使用濃度為125μg/mL。注：使用篩選大腸桿菌穩(wěn)轉(zhuǎn)株需要的pH值調(diào)節(jié)，而且受宿主細胞本身的影響。

2.溶解方法

    用蒸餾水溶解配制成50 mg/ml的母液，經(jīng)0.22 μm濾膜過濾除菌后分裝于-20℃凍存；也可溶于甲醇，配制成10 mg/ml的儲存液。

3. 殺滅曲線的確定（以shRNA轉(zhuǎn)染或者慢病毒轉(zhuǎn)導為例）

    有效篩選濃度跟細胞類型、生長狀態(tài)、細胞密度、細胞代謝情況及細胞所處細胞周期位置等有關(guān)。為了篩選到穩(wěn)定表達的shRNA細胞株，確定殺死未轉(zhuǎn)染/轉(zhuǎn)導細胞的低濃度關(guān)重要。建議初次做實驗的客戶一定要建立適合自身實驗體系的殺死曲線（kill curve）。

    1） Day 1：24孔板內(nèi)以5~8 x 104 cells/孔的密度鋪板，鋪足夠量的孔以進行后續(xù)的梯度實驗。37℃細胞孵育；

    2） Day 2：a）準備篩選培養(yǎng)基：含不同濃度的新鮮培養(yǎng)基（如0-15μg/mL，少5個梯度）；b）往孵育后的細胞內(nèi)更換新鮮配制的篩選培養(yǎng)基；之后37℃孵育細胞；

   3） Day 4：更換新鮮的篩選培養(yǎng)基，并觀察細胞存活率。

   4） 根據(jù)細胞的生長狀態(tài)，約2-3天更換新鮮的篩選培養(yǎng)基；

   5） 每日監(jiān)測細胞，觀察存活細胞率，從而確定抗生素篩選開始4-6天內(nèi)有效殺死非轉(zhuǎn)染或者所有非轉(zhuǎn)導細胞的藥物低濃度。

4. 哺乳動物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株的篩選

    等轉(zhuǎn)染含有pac基因的質(zhì)粒后，細胞在含有的培養(yǎng)基中增殖，以篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染子。

    1）細胞轉(zhuǎn)染48h后，將細胞（原樣或稀釋）置于含有適當濃度的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

注意：當細胞處于活躍期時，抗生素作用明顯。細胞過于密集，抗生素產(chǎn)生的效力會明顯下降。好進行細胞分盤使其密度不超過25%。

    2）每隔2-3天，移除和更換含有的培養(yǎng)基。

    3）篩選7天后評估細胞形成的病灶。病灶可能需要額外的一周或者更多時間，這依賴于宿主細胞系和轉(zhuǎn)染篩選效率。注意：每日進行細胞生長狀態(tài)的觀察。的篩選少需要48h，有效濃度的篩選周期一般在3-10天。

    4）轉(zhuǎn)移和放置5-10個抗性克隆到一個35mm的培養(yǎng)皿中，用選擇培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)7天。此次富集培養(yǎng)是為日后的細胞毒性實驗做準備。

注意事項

1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

2）為有毒化合物，操作時請小心拿放。

Puromycin dihydrochloride hydrate
Catalog Number： P8230
Specifications
Purity:  ≥98%(TLC)
Physical Appearance: White to off-white powder
Storage
Desiccate at -20° C
Properties
Molecular Weight:  544.43
Molecular Formula:  C22H29N7O5·2HCl
Solubility: Soluble in water (50 mg/ml)
Product Description
Puromycin belongs to the amino-nucleoside family of antibiotics and is isolated from Streptomyces alboniger. Since the
partial structure of this antibiotic showed it to be a purine derivative, puromycin was assigned as its generic name.
Puromycin is a broad spectrum antibiotic and antibacterial agent. It is active against Gram-positive microorganisms,
less active against acid-fast bacilli, and weakly active against Gram-negative microorganisms.It acts very quickly and
can kill 99% of the cells within 2 days. It also exhibits antitumor activity in studies on brain tumor cells.
Puromycin is a protein synthesis inhibitor that causes premature chain termination by acting as an analog of the
3’-terminal end of aminoacyl-tRNA. It has been used to study transcriptional regulatory mechanisms that control the
sequential and coordinate expression of genes during cell differentiation.
Usage:
A stock solution of 10 mg/mL(in water ) should be sterilized by filtration through a 0.22um filter and stored frozen. It
is tested on HeLa cells for cell growth arrest and selection of cells after transfection of the pac resistance gene. Hela
cells were found to be resistant to a concentration of 0.1-0.3ug/ml and sensitive to a concentration in the range of 1-10
ug/ml.
For selection of pac-containing colonies after transfection it is better to use the antibiotic supplemented in the cell
medium 2 days after transfection, in the range of 1-6 ug/ml. Colonies will appear 7-10 days after transfection.
The optimal working concentration of puromycin varies between cell lines. Usually, the working concentration
for eukaryote cell culture is 1-10ug/ml.
Storage/Stability
Store the product at –20 °C. Under these conditions, the product remains active for two years.

訂購說明：
1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨，一般情況下都能訂貨當日發(fā)貨。 
2、部分非常用產(chǎn)品，需提前1－2日預訂，海外期貨則需要提前3-6周預訂。 
3、部分產(chǎn)品價格會因貨期、批次等因素發(fā)生變化，若有變動以訂貨當日新價格為準。 
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運輸說明：
1、極低溫產(chǎn)品：極低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實驗保駕護航。
2、低溫產(chǎn)品：低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴實密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續(xù)一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實驗保駕護航。
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產(chǎn)品實物圖：