蛋白質(zhì)電泳 SDS-PAGE凝膠制備試劑盒

蛋白質(zhì)電泳 SDS-PAGE凝膠制備試劑盒
貨號(hào) ：P1200-1/P1200-2
規(guī)格 ：25 塊/50 塊 SDS-PAGE 凝膠
產(chǎn)品內(nèi)容 ：
產(chǎn)品簡(jiǎn)介 ：
本公司生產(chǎn)的 SDS-PAGE 凝膠制備試劑盒是按照經(jīng)典方法配制而成。本試劑盒提供了配制 SDS-PAGE 凝膠
所需的各種試劑，用戶只需自備制膠器具和蒸餾水，即可配制 PAGE 膠。本試劑盒可配制不同規(guī)格、不同聚合度
的 PAGE 膠(即聚丙烯酰胺凝膠) 約 25/50 塊。
注意事項(xiàng) ：
1、TEMED 和 10%過硫酸銨后加，在加入前需混勻前面所加試劑。10%過硫酸銨在 4℃有效期為一周；
TEMED 易揮發(fā)，使用后請(qǐng)蓋緊瓶蓋。在常溫下膠 30 分鐘內(nèi)可以凝固，如溫度過低，可放 37℃溫箱凝固。灌完
分離膠后，輕輕的加 1ml ddH2O 封上層，膠凝固后可見到分界線。灌濃縮膠前，先傾去水層，再用吸紙吸干。濃
縮膠灌好后立刻插入梳子。濃縮膠凝固后，放入電泳液中(讓電泳液漫過加樣孔)，輕輕的撥出梳子，可防加樣孔
變形。
2、配制量可按上表等比加減。如果所用膠濃度與上面不同，可自行調(diào)整，主要是調(diào)整 30%丙烯酰胺的量（需
要濃度×總體積/30%） ，后用水補(bǔ)足總體積。
配膠說明 ：
1、先在過硫酸銨干粉中加入蒸餾水或去離子水(每克過硫酸銨需加水 10ml)配置成 10%溶液，將溶液分裝成
小體積后凍存于-20℃，制備凝膠時(shí)融化后使用，10%過硫酸銨溶液現(xiàn)用現(xiàn)配，4℃有效期 7-30 天。
2、檢測(cè) SDS 溶液是否澄清，若出現(xiàn)絮狀物或沉淀可放 37℃片刻溶解，不影響效果。

蛋白質(zhì)電泳 SDS-PAGE凝膠制備試劑盒

 SDS PAGE凝膠電泳的作用
SDS是陰離子去污劑，作為變性劑和助溶試劑，它能斷裂分子內(nèi)和分子間的氫鍵，使分子去折疊，破壞蛋白分子的二、三級(jí)結(jié)構(gòu)。而強(qiáng)還原劑如疏基乙醇，二硫蘇糖醇能使半胱氨酸殘基間的二硫鍵斷裂。在樣品和凝膠中加入還原劑和SDS后，分子被解聚成多肽鏈，解聚后的氨基酸側(cè)鏈和SDS結(jié)合成蛋白- SDS膠束，所帶的負(fù)電荷大大超過了蛋白原有的電荷量，這樣就消除了不同分子間的電荷差異和結(jié)構(gòu)差異。
SDS-PAGE一般采用的是不連續(xù)緩沖系統(tǒng)，與連續(xù)緩沖系統(tǒng)相比，能夠有較高的分辨率。
濃縮膠的作用是有堆積作用，凝膠濃度較小，孔徑較大，把較稀的樣品加在濃縮膠上，經(jīng)過大孔徑凝膠的遷移作用而被濃縮一個(gè)狹窄的區(qū)帶。當(dāng)樣品液和濃縮膠選TRIS/HCl緩沖液，電極液選TRIS/甘氨酸。電泳開始后，HCl解離成氯離子，甘氨酸解離出少量的甘氨酸根離子。蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷，因此一起向正極移動(dòng)，其中氯離子快，甘氨酸根離子慢，蛋白居中。電泳開始時(shí)氯離子泳動(dòng)率大，超過蛋白，因此在后面形成低電導(dǎo)區(qū)，而電場(chǎng)強(qiáng)度與低電導(dǎo)區(qū)成反比，因而產(chǎn)生較高的電場(chǎng)強(qiáng)度，使蛋白和甘氨酸根離子迅速移動(dòng)，形成一穩(wěn)定的界面，使蛋白聚集在移動(dòng)界面附近，濃縮成一中間層。
此鑒定方法中，蛋白質(zhì)的遷移率主要取決于它的相對(duì)分子質(zhì)量，而與所帶電荷和分子形狀無關(guān)。
SDS PAGE凝膠電泳的特性
(1)在一定濃度時(shí)，凝膠透明，有彈性，機(jī)械性能好；
(2)化學(xué)性能穩(wěn)定，與被分離物不起化學(xué)反應(yīng)，在很多溶劑中不溶；
(3)對(duì)pH和溫度變化較穩(wěn)定；
(4)幾乎無吸附和電滲作用，只要Acr純度高，操作條件一致，則樣品分離重復(fù)性好；
(5)樣品不易擴(kuò)散，且用量少，其靈敏度可達(dá)10-6ug
(6)凝膠孔徑可調(diào)節(jié)，根據(jù)被分離物的分子量選擇合適的濃度，通過改變單體及交聯(lián)劑的濃度調(diào)節(jié)凝膠的孔徑；
(7)分辨率高，尤其在不連續(xù)凝膠電泳中，集濃縮、分子篩和電荷效應(yīng)為一體。因而較醋酸纖維薄膜電泳、瓊脂糖電泳等有更高的分辨率。

參考文獻(xiàn)：

《Dexmedetomidine attenuates the neurotoxicity of propofol toward primary hippocampal neurons in vitro via Erk1/2/CREB/BDNF signaling pathways》 作者:Youbing Tu, Yubing Liang, Yong Xiao, Jing Lv, Ruicong Guan, Fei Xiao, Yubo Xie, and Qiang Xiao 期刊:Drug Design, Development and Therapy 影響因子:3.486 PMID:30858699
《Long noncoding RNA ENST00000413528 sponges microRNA‐593‐5p to modulate human glioma growth via polo‐like kinase 1》 作者:Ren Zhang，Ruo‐Lun Wei，Wei Du，Li‐Wei Zhang，Tao Du，Ya‐Dong Geng，Xin‐ting Wei 期刊:CNS Neuroscience & Therapeutics 影響因子:4.458 PMID:30924320