Western blotting熒光檢測ECL超敏發(fā)光液

Western blotting熒光檢測ECL超敏發(fā)光液
貨號 ：PE0010 
規(guī)格 ：25ml/100ml
保存 ：4℃密封避光保存有效期一年以上。25℃室溫放置數(shù)月不影響質(zhì)量。

產(chǎn)品簡介 ：
    ECL Plus 超敏發(fā)光液直接或間接檢測與辣根過氧化物酶 HRP 關(guān)聯(lián)的蛋白或核酸底物。這一*的發(fā)光底物系統(tǒng)是目前靈敏的商業(yè)化熒光 ECL 檢測試劑，具有靈敏度和高信噪比，可檢測出 10-100 fg 的微量抗原；發(fā)光迅速，熒光可使 X 感光膠片感光達(dá) 12 小時以上，特別適用于痕量蛋白或核酸檢測。同時該試劑允許使用更高的抗體稀釋倍數(shù)（1：2000-1：10000），極其節(jié)省抗體。
用途：用于 HRP 標(biāo)記抗體的 Western Blot 和 HRP 標(biāo)記探針的核酸雜交。
安全性：無特殊毒性，按普通化學(xué)品處理。

    經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達(dá)。Western blotting 檢測系統(tǒng)除需要過氧化物酶標(biāo)記的各種二抗外，還需要配套的顯色試劑。索萊寶提供DAB顯色和ECL化學(xué)發(fā)光兩種試劑及相應(yīng)試劑盒。

使用方法 ：
    1、常規(guī)電泳、轉(zhuǎn)膜、HRP 標(biāo)記抗體或核酸探針孵育、洗膜。注意用 HRP 標(biāo)記 IgG 或用一抗-鏈親和素-生物素-HRP 夾心法。核酸雜交膜用 HRP 標(biāo)記探針雜交，洗膜。
    2、在洗滌膜上的 HRP 標(biāo)記二抗的同時，新鮮配制發(fā)光工作液：分別取等體積的溶液 A 和 B 混合，放置使之恢復(fù)室溫否則會減弱熒光強(qiáng)度。建議立即使用工作液，室溫放置數(shù)小時后仍可使用但靈敏度略有減低。
    3、用鑷子取出膜，搭在濾紙上瀝干洗液但勿使膜*干燥。將膜*浸入并與發(fā)光工作液充分接觸（約0.125ml 發(fā)光工作液/cm 2 膜）。室溫孵育 3 分鐘后立即壓片曝光。孵育時間過長不會增加靈敏度，有時還會導(dǎo)致曝光條帶異常。發(fā)光過程的本質(zhì)是酶促反應(yīng)，使用過少的發(fā)光工作液不利于反應(yīng)進(jìn)行，也會導(dǎo)致膜上條帶曝光不均勻和靈敏度明顯降低。為達(dá)節(jié)約目的可將膜剪小但勿降低發(fā)光液用量。
    4、用鑷子夾起膜，搭在濾紙上瀝干發(fā)光工作液。但勿洗去發(fā)光液。
    5、在 X 光膠片暗盒內(nèi)面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將雜交膜貼在保鮮膜上，將保鮮膜折起來*包裹雜交膜，去除氣泡和皺褶，可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發(fā)光工作液。用膠帶將覆蓋雜交膜的保鮮膜固定在暗盒內(nèi)，好蛋白帶面向上。
    6、在黑暗中放入 X 感光膠片，分別曝光不同的時間如數(shù)秒到數(shù)分鐘。顯影沖洗。
 

注意事項 ：
    1、步驟 1-5 可在日光燈下操作；但發(fā)光液暴露于強(qiáng)光下時間過久靈敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免。戴手套可以避免在膜上留下手印，保持膜的潔凈。
    2、長時間曝光或蛋白質(zhì)過量，將加深背景并使條帶強(qiáng)弱變化失去線性關(guān)系。曝光不足則條帶模糊。
    3、 發(fā)光工作液孵育約 3 分鐘后膜上的條帶發(fā)光。 強(qiáng)條帶發(fā)光在暗房中肉眼可見， 低豐度蛋白條帶發(fā)光較弱，肉眼雖不可見但能使 X 膠片曝光。不能單憑肉眼觀察判斷條帶發(fā)光時間。肉眼不可見的熒光實(shí)際上可持續(xù)數(shù)小時并使 X 膠片感光，因而弱帶可曝光 1-10 小時。如果曝光后條帶不佳，可用洗膜緩沖液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用 ECL 發(fā)光和曝光。
    4、 由于超敏發(fā)光液的高靈敏度， 強(qiáng)烈推薦大多數(shù)進(jìn)口抗體起始濃度為一抗 1： 1000-1： 4000， 二抗 1： 2000-1：5000?？贵w濃度過高將造成高背景或沒有條帶，導(dǎo)致失??！
    5、某些市售保鮮膜包裹印跡膜時會淬滅熒光，應(yīng)選擇高質(zhì)量保鮮膜，例如“克林萊”牌保鮮膜。
   6、 使用肉眼可見的預(yù)染色蛋白 Marker 和熒光-放射自顯影曝光標(biāo)簽可幫助確定膠片上條帶的準(zhǔn)確位置和大小。
   7、NaN3 能抑制 HRP 活性，回收二抗時應(yīng)避免使用 NaN3，如必需使用勿超過 0.01%。 
 

相關(guān)產(chǎn)品 ：

P1020  1×PBS ， PH7.2-7.4 ， 0.01M
P1010  4× 蛋白上樣緩沖液（含 β- 巰基乙醇）
P1300  SDS-PAGE 凝膠制備試劑盒
PR1700 預(yù)染次高分子量蛋白 MARKER
T1070  5×Tris- 甘氨酸電泳緩沖液
D1060  10× 電泳轉(zhuǎn)移緩沖液
SW3010 膜封閉液
SW3020 膜再生液

參考文獻(xiàn)：
《Glutamine Enhances the Hypoglycemic Effect of Insulin in L6 Cells via Phosphatidylinositol-3-Kinase (PI3K)/Protein Kinase B (AKT)/Glucose Transporter 4 (GLUT4) Signaling Pathway》 作者:Caijuan Wang, Yujiao Deng, Yenan Yue, Wenting Chen, Yu Zhang, Guifang Shi, and Zhongming Wu 期刊:Medical Science Monitor 影響因子:1.98 PMID:29491345
《Stem cells from human exfoliated deciduous teeth ameliorate type II diabetic mellitus in Goto-Kakizaki rats》 作者:Nanquan Rao, Xiaotong Wang, Yue Zhai, Jingzhi Li, Jing Xie, Yuming Zhao and Lihong Ge 期刊:Diabetology & Metabolic Syndrome 影響因子:2.361 PMID:30858895
《Laminar shear stress alters endothelial KCa2.3 expression in H9c2 cells partially via regulating the PI3K/Akt/p300 axis》 作者:Guojian Li, Qionghui Yang, Yong Yang, Guokai Yang, Jia Wan, Zhenhuan Ma, Lingjuan Du, Yi Sun, and Guimin Zhang 期刊:International Journal of Molecular Medicine 影響因子:2.928 PMID:30664154
《IL‐37 inhibits invasion and metastasis in non‐small cell lung cancer by suppressing the IL‐6/STAT3 signaling pathway》 作者:Mingfang Jiang,  Ye Wang,  Hua Zhang,  Youxin Ji,  Peng Zhao,  Rongli Sun,  Chunling Zhang 期刊:Thoracic Cancer 影響因子:2.569 PMID:29575809
《Synergistic protection of matrine and lycopene against lipopolysaccharide?induced acute lung injury in mice》 作者:Wu?Wei Li， Tao?Yuan Wang ，Bo Cao， Bin Liu， Yu?Mei Rong ，Juan?Juan Wang ，F(xiàn)ei Wei ，Lu?Qing Wei， Hong Chen ，Yan?Xia Liu 期刊:Molecular Medicine Reports 影響因子:1.851 PMID:31180535
《C14orf159 suppresses gastric cancer cells’ invasion and proliferation by inactivating ERK signaling》 作者:Yan-Mei Zhu,Qiang Li, Xiao-Zhuo Gao, Xiao Meng, Li-Li Sun,Yu Shi,En-Tian Lu and Yong Zhang 期刊:Cancer Management and Research 影響因子:2.243 PMID:30863180
《Study of As2O3 regulating proliferation and apoptosis of Tca8113 cells by inhibiting the expression of Id-1》 作者:Yanfeng Zhu, Weihui Chen, Weiqun Guan, Yihong Fang & Chunfeng Hao 期刊:Artificial Cells, Nanomedicine, and Biotechnology 影響因子:4.462 PMID:31079498
《Sphingosine-1-Phosphate Improves the Biological Features of Mouse Bone Marrow-Derived EPCs Partially through PI3K/AKT/eNOS/NO Pathway》 作者:Xia Wang， Enxin Zhan ，Guohua Lu ， Qingjie Mu， Tianliang Zhang and Nana Yang 期刊:Molecules 影響因子:3.06 PMID:31261859

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