亞細(xì)胞器提取試劑盒細(xì)胞核提取試劑盒

亞細(xì)胞器提取試劑盒細(xì)胞核提取試劑盒
貨號：SN0020
規(guī)格：50T/100T
保存：短期使用可 4℃儲(chǔ)存，長期保存請置于-20℃或-70℃。

產(chǎn)品內(nèi)容：

產(chǎn)品簡介：
    細(xì)胞核提取試劑盒用于從動(dòng)物細(xì)胞或組織中分離出完整而純化的細(xì)胞核。 適合于動(dòng)物軟組織 （肝或腦組織）和硬組織（肌肉）以及培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞核的制備。其制備物產(chǎn)量高，可以被用于細(xì)胞凋亡、信號傳遞、代謝和蛋白組學(xué)等的研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶和核酶，性能穩(wěn)定。

操作步驟：
1. 樣本處理
    a. 組織勻漿：稱取 100~200 mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等，PBS或生理鹽水沖洗，洗凈血水，濾紙吸干，用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內(nèi)。加入 1.0 mL預(yù)冷的Lysis Buffer，再加入 50ulLReagent A ， 0℃冰浴中上下研磨組織 20 次；有未研磨開的組織，可用雙層紗布過濾。
   b. 培養(yǎng)細(xì)胞勻漿：消化細(xì)胞，PBS洗滌，800 g 離心 5~10 min收集細(xì)胞，計(jì)數(shù)。每次提取需要 5 ×10 7 個(gè)細(xì)胞，加入 1.0 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸細(xì)胞，再加入 50ul Reagent A，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi)，0℃冰浴研磨細(xì)胞 20~30 次。
2. 將組織或細(xì)胞勻漿物轉(zhuǎn)移到 1.5ml離心管中，4℃，700g 離心 5 min。細(xì)胞核沉淀在收集管底部，棄上清。加入 0.5 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸沉淀。
3. 取另一新離心管內(nèi)加入 0.5 mL Medium Buffer，吸取上一步的重懸液，沿管壁小心地加入到此離心管中，置于Medium Buffer之上，4℃，700 g 離心 5min。細(xì)胞核沉淀在管底。
4. 棄上清，在細(xì)胞核沉淀中加入 0.5 mL Lysis Buffer重懸細(xì)胞核沉淀，1000g 離心 10min ，棄上清，得到較純的細(xì)胞核沉淀。
5. 用 50-100μL Store Buffer 或合適的反應(yīng)緩沖液重懸細(xì)胞核沉淀，立即使用或-70℃保存。

注意事項(xiàng)：
    1. 為保證獲得完整的細(xì)胞核，務(wù)必做到：*，全程低溫操作；第二，快速；第三，在不破壞亞細(xì)胞器的情況下破碎細(xì)胞，這是制備細(xì)胞核的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。與組織塊相比，培養(yǎng)細(xì)胞特別是貼壁培養(yǎng)細(xì)胞在用玻璃勻漿器勻漿時(shí)較難破壁，因而要選用小容量玻璃勻漿器、間隙嚴(yán)密的研杵上下研磨培養(yǎng)細(xì)胞。
   2. 以離心力g計(jì)算正確的離心速度，不同的離心機(jī)可據(jù)此計(jì)算離心速度。
   3. 進(jìn)行Western Blot和 2D-膠電泳，可直接加入上樣緩沖液裂解細(xì)胞核。
轉(zhuǎn)速與離心力換算:
G＝1.11×(10-5)×R×[rpm] 2
G為離心力，一般以ｇ（重力加速度）的倍數(shù)來表示；
[rpm] 2 即：轉(zhuǎn)速的平方； R為半徑，單位為厘米。

相關(guān)產(chǎn)品：

P1020 1×PBS ， PH7.2-7.4 ， 0.01M
P1015 4× 蛋白上樣緩沖液（含 DTT ）
SM0020 線粒體提取試劑盒

亞細(xì)胞器提取試劑盒細(xì)胞核提取試劑盒訂購說明：

1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨，一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。 
2、部分非常用產(chǎn)品，需提前1－2日預(yù)訂，海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。 
3、部分產(chǎn)品價(jià)格會(huì)因貨期、批次等因素發(fā)生變化，若有變動(dòng)以訂貨當(dāng)日新價(jià)格為準(zhǔn)。 
4、每日訂單截止時(shí)間為16點(diǎn)整，部分城市可到17點(diǎn)整，因超過截止時(shí)間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請辦理完貨款后，將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。

運(yùn)輸說明：

1、極低溫產(chǎn)品：極低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中加裝干冰運(yùn)輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
2、低溫產(chǎn)品：低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中加裝索萊寶冰袋運(yùn)輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴(yán)實(shí)密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續(xù)一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
3、常溫產(chǎn)品：常溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫房人員快速配貨，準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達(dá)您的手中。