蛋白質(zhì)電泳試劑1×Tris-tricine-SDS-PAGE電泳緩沖液（陽極+）

蛋白質(zhì)電泳試劑1×Tris-tricine-SDS-PAGE電泳緩沖液（陽極+）
貨號：T1225
規(guī)格：500ml

產(chǎn)品簡介 ：
    常規(guī)的 Tris-SDS-PAGE 電泳的只能分辨大分子蛋白， 對于相對分子量小的， 尤其是 10 kD 以下的蛋白分辨率極低。而 Tricine-SDS-PAGE 可以很好的分離分子量在 1-10 kD 的蛋白及多肽，成為目前電泳法變性分離多肽的主要方法。本產(chǎn)品包括 Tricine-SDS- PAGE 凝膠制備所需全套試劑，只需自備蒸餾水，即可制備高質(zhì)量各種濃度的凝膠，方便、快捷，電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交等實驗。 

    聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺和交聯(lián)劑N,N-甲叉雙丙烯酰胺在加速劑N，N，N，N—四甲基乙二胺(簡稱TEMED)和催化劑過硫酸銨(簡稱AP)或核黃素(即vitamin B2)的作用下聚合交聯(lián)成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠，以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙烯酰胺凝膠電泳
(polyacrylamide gel electrophoresis，簡稱PAGE)

    SDS－PAGE是在要電泳的樣品中加入含有SDS和β-巰基乙醇(或者DTT)的樣品處理液，SDS可以斷開分子內(nèi)和分子間的氫鍵，破壞蛋白質(zhì)分子的二級和三級結(jié)構(gòu)，β-巰基乙醇可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵，破壞蛋白質(zhì)的四級結(jié)構(gòu)。SDS還與蛋白質(zhì)結(jié)合使蛋白質(zhì)－SDS復(fù)合物上帶有大量的負(fù)電荷，這時各種蛋白質(zhì)分子本身的電荷*被SDS掩蓋。這樣電泳時，就消除了各種蛋白質(zhì)本身電荷及結(jié)構(gòu)上的差異，電泳速度只是與蛋白質(zhì)分子量有關(guān)。用本法測定蛋白質(zhì)的分子量只需根據(jù)待測蛋白質(zhì)在已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)圖中的位置，就能得知分子量。

注意事項 ：
    1、 10%APS 配制后分裝-20 度保存。 APS 溶液不穩(wěn)定， 應(yīng)盡量減少室溫存放時間， 每次取用后立即放回冰箱，以防失效；若發(fā)現(xiàn)凝膠聚合時間延長，應(yīng)考慮更換，使用-20 度保存的 10%APS。
    2、在凝膠配制過程中，尤其是液體混勻步驟，應(yīng)盡量避免氣泡的產(chǎn)生。
    3、在分離膠上層加蒸餾水時要小心操作，加水時速度不能太快。
    4、丙烯酰胺具有神經(jīng)毒性，操作時請穿著實驗服并佩戴一次性手套。
    5、本產(chǎn)品僅用于科研，不能用于人體實驗或人體治療。

I 配制分離膠
    1、將不同體積的雙蒸水、49.5%T 6%C 、凝膠緩沖液和甘油加入到離心管中混合。
    2、加入 10%APS 和 TEMED，立即渦旋混勻 5-10 秒，以使溶液充分混勻。
    3、在凝膠模具中迅速灌入適量分離膠溶液（1 mm mini-gel，分離膠溶液加約 4 ml ） ，然后在分離膠溶液上輕輕 覆蓋一層 1-3 cm 的水層，使凝膠表面保持平整。
    4、靜置，待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個清晰的界面表示凝膠已聚合。
II  配制夾層膠
    去除覆蓋在分離膠上的水層，用濾紙將殘留的水盡量吸去。
    1、將不同體積的雙蒸水、49.5%T 3%C 和凝膠緩沖液加入到離心管中混合。
    2、加入 10%過硫酸銨和 TEMED，立即渦旋混勻 5-10 秒，以使溶液充分混勻。
    3、將適量的夾層膠溶液迅速加分離膠的上面（對于 1 mm 的 mini-gel，夾層膠溶液加約 1 ml ） ， 然后在夾層膠溶液上輕輕覆蓋一層水層，使凝膠表面保持平整。
    4、靜置，待夾層膠和水層之間出現(xiàn)一個清晰的界面表示凝膠已聚合。
III 配制濃縮膠去除覆蓋在夾層膠上的水層，用濾紙將殘留的水吸去。
    1、將不同體積的雙蒸水、49.5%T 3%C 和凝膠緩沖液加入到離心管中混合。
    2、加入 10%過硫酸銨和 TEMED，立即渦旋混勻 5-10 秒，以使溶液充分混勻。
    3、將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。
    4、待凝膠聚合后，小心地拔出梳子，以免破壞加樣孔。
    5、進行電泳操作。

IV 電泳
   將電泳槽放入 4℃或冰水浴中，外槽加入陽極緩沖液（T1225） ，內(nèi)槽加入陰極緩沖液（T1215） ，30V 預(yù)電泳
   10min，將樣品（已經(jīng)過 Tricine 上樣緩沖液 P1325 處理）加入點樣孔后 30V 電泳 1 小時，100V 電泳溴酚
   藍到達膠底部后停止電泳，進行后續(xù)的考馬斯亮藍染色或電轉(zhuǎn)。

常規(guī)SDS聚丙烯酰胺凝膠配制方法
試劑            分離膠8%   分離膠10%   分離膠12%   濃縮膠4%
配制量           10ml       10ml         10ml        5ml
30%丙烯酰胺      2.67ml     3.33ml       4.0ml      0.67ml
1.5mol/LTris(pH8.8)2.5ml    2.5ml        2.5ml      -
1.0mol/LTris(pH6.8) -       -            -           0.625ml
10%SDS           100ul      100ul        100ul       50ul
ddH2O             4.6ml      4.0ml       3.3ml      3.6ml
TEMED             10ul       10ul        10ul       5ul
10%過硫酸銨       100ul      100ul       100ul      50ul
注意：TEMED和10%過硫酸銨后加，在加入前需混勻前面所加試劑。10%過硫酸銨在4℃有效期為一周，TEMED易揮發(fā)，使用后請蓋緊瓶蓋。在常溫下膠30分鐘內(nèi)可以凝固，如溫度過低，可放37℃溫箱凝固。灌完分離膠后，輕輕的加1mlddH 2 O封上層，膠凝固后可見到分界線。灌濃縮膠時，先傾去水層，再用吸紙吸干。灌濃縮膠后立刻插入梳子。濃縮膠凝固后，放入電泳液中(讓電泳液漫過加樣孔)，輕輕的撥出梳子，可防加樣孔變形。

蛋白質(zhì)電泳試劑1×Tris-tricine-SDS-PAGE電泳緩沖液（陽極+）訂購說明：

1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨，一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。 
2、部分非常用產(chǎn)品，需提前1－2日預(yù)訂，海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。 
3、部分產(chǎn)品價格會因貨期、批次等因素發(fā)生變化，若有變動以訂貨當(dāng)日新價格為準(zhǔn)。 
4、每日訂單截止時間為16點整，部分城市可到17點整，因超過截止時間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請辦理完貨款后，將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。

蛋白質(zhì)電泳試劑1×Tris-tricine-SDS-PAGE電泳緩沖液（陽極+）運輸說明：

1、極低溫產(chǎn)品：極低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實驗保駕護航。
2、低溫產(chǎn)品：低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴(yán)實密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續(xù)一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實驗保駕護航。
3、常溫產(chǎn)品：常溫產(chǎn)品運輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫房人員快速配貨，準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達您的手中。