超氧化物歧化酶 （Superoxide Dismutase ，SOD ）

超氧化物歧化酶 （Superoxide Dismutase ，SOD ） 試劑盒說明書
酶標(biāo)法 100 管/96 樣
產(chǎn)品簡介 ：
SOD（EC 1.15.1.1）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，催化超氧化物陰離子發(fā)生岐化作用，
生成 H2O2 和 O2。SOD 不僅是超氧化物陰離子清除酶，也是 H2O2 主要生成酶，在生物抗氧化系統(tǒng)中具有
重要作用。
通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子(O2-.)，O2-.可還原氮藍(lán)四唑生成藍(lán)色甲臜，后者
在 560nm 處有吸收；SOD 可清除 O2-.，從而抑制了甲臜的形成；反應(yīng)液藍(lán)色越深，說明 SOD 活性愈低，
反之活性越高。
試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：
酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、酶標(biāo)板、研缽、冰和蒸餾水
產(chǎn)品內(nèi)容 ：
提取液：60mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：5 mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×5 支，4℃保存，用時(shí)每支加 2mL 雙蒸水，充分混勻，現(xiàn)配現(xiàn)用。
試劑三：液體 300ul×1 支，4℃保存；
試劑四：液體 4mL×1 瓶，4℃保存；
操洽步驟 ：
一 、 樣品 的前處理 ：
(1) 細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清，按照每 200 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 400µL 提取液，超聲波破
碎（功率 20%。超聲 3 秒，間隔 10 秒。重復(fù) 30 次）。8000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待測。
稱取約 0.05g 組織，加入 0.5mL 提取液進(jìn)行冰浴勻漿； 8000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待測。
(2) 血清(漿)樣品：直接檢測
二 、 測定操作表 ：
測定管  對照管
試劑一（µL）  45  45
試劑二（µL）  100  100
試劑三（µL）  2  2
樣品（µL）  15 
試劑四（µL）  35  35
雙蒸水（µL）  15
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充分混勻，室溫靜置 30min 后，560nm 處測定各管吸光值。
注意事項(xiàng) ：
1， 測定前將試劑一、二和四室溫放置，使試劑的溫度不低于室溫后再測定。
2， 試劑三為酶，不可冷凍，使用時(shí)在冰上放置。
3， 對照管只需要做一管。
SOD  活 性 計(jì)算 ：
1、抑制百分率的計(jì)算
抑制百分率＝( A 對照管－A 測定管) ÷A 對照管 × 100%
盡量使樣品的抑制百分率在 30-70%范圍內(nèi)。如果計(jì)算出來的抑制百分率小于 30% 或大于 70% ，則通
常需要調(diào)整加樣量后重新測定。如果測定出來的抑制百分率偏高，則需適當(dāng)稀釋樣品；如果測定出來的抑
制百分率偏低，則需重新準(zhǔn)備濃度比較高的待測樣品。
2、SOD 酶活性單位：在上述黃嘌呤氧化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為 50% 時(shí)，反應(yīng)體系中的 SOD
酶活力定義為一個酶活力單位。
3、SOD 酶活性計(jì)算：
（1）血清（漿）SOD 活性（U/ml）= 抑制百分率÷( 1－抑制百分率)
（2）組織、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞 SOD 活力計(jì)算：
a，按樣本蛋白濃度計(jì)算
SOD 活性（U/mg prot）= 抑制百分率÷(1－抑制百分率)÷樣本蛋白濃度（mg/mL）。
b，按樣本鮮重計(jì)算
SOD 活性（U/g 鮮重）= 抑制百分率÷(1－抑制百分率)÷樣本鮮重（g/mL）。
c，按細(xì)菌或細(xì)胞個數(shù)計(jì)算
SOD 活力（U/10 4  cell）= 抑制百分率÷(1－抑制百分率)÷細(xì)菌或細(xì)胞密度（10 4 /mL）