辛基- - 瓊脂糖凝膠 HP

辛基- - 瓊脂糖凝膠 P HP  說(shuō)明書(shū) ：
貨號(hào) ：S9290
規(guī)格 ：25ml
保存 ：4℃~30℃保存，保質(zhì)期 3 年。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介 ：
辛基-瓊脂糖凝膠HP是將辛基鍵合在瓊脂糖凝膠上形成的一種可利用疏水相互作用來(lái)實(shí)現(xiàn)目標(biāo)產(chǎn)品純
化分離的疏水類(lèi)介質(zhì)。用于生物大分子和乙肝疫苗的純化分離。
本品為白色球狀凝膠，無(wú)嗅、無(wú)味、無(wú)肉眼可見(jiàn)雜質(zhì)。
理化指標(biāo)：
項(xiàng) 目  指 標(biāo)
配 基  R-O-CH 2 -CH(OH)-CH 2 -O- (CH 2 ) 7 -CH 3
基 質(zhì)  交聯(lián)瓊脂糖
形 狀  球形
粒 徑  24~44 µm
蛋白質(zhì)吸附容量（HSA）  15-20mg/ml
流速(25℃)   100 cm/h *
耐 壓  0.15 MPa
工作溫度  4~40℃
pH 適用范圍  2~14（短時(shí)間，在位清洗） ；3~12（長(zhǎng)時(shí)間）
化學(xué)穩(wěn)定性
以下溶液中穩(wěn)定：
1mol/L NaOH；70%EtOH；30%異丙醇；0.5%SDS；
6mol/L 鹽酸胍；8mol/L 尿素；3 mol/L(NH 4 ) 2 SO 4
*柱子：內(nèi)徑 50mm、柱長(zhǎng) 30cm。柱床高 15cm,25℃, 流動(dòng)相為 0.1mol/LNaCl。
使?說(shuō)明 ：
辛基-瓊脂糖凝膠 HP 是一種疏水層析介質(zhì)，利用樣品中組分疏水性的不同進(jìn)行分離。用于生物大分子
的純化分離。
操作流程：
1 、 裝柱
（1）讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫。配制初始緩沖液（平衡液）和洗脫緩沖液。
（2）根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠，清洗掉 20%乙醇，抽干，用初始緩沖液（按凝膠：緩沖液=3：1 的
比例）配成勻漿。
（3）將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一小段液位（液面略高于濾膜） ，務(wù)必使底端無(wú)氣泡。
（4）用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開(kāi)柱子出液口，使凝膠在柱
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內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。
（5）打開(kāi)蠕動(dòng)泵，讓緩沖液用使用時(shí)流速的 1.33 倍的流速流過(guò)，使柱床穩(wěn)定。用 2~3 倍柱體積的緩沖液
平衡柱子。
2 、 平衡
讓平衡緩沖液以一定流速流過(guò)柱子，到流出液電導(dǎo)和 pH 不變。平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液，
如 0.02~0.05mol/L 的 PBS 加 1~2.5mol/L(NH 4 ) 2 SO 4 等。
3 、 上樣
（1）樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心和過(guò)濾后上樣。
（2）一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上，用平衡液洗去雜質(zhì)，再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。
（3）介質(zhì)對(duì)樣品組分吸附的程度取決于樣品的疏水性質(zhì)、流動(dòng)相的離子強(qiáng)度和溫度。鹽濃度大、溫度高
或樣品組分疏水性強(qiáng)，介質(zhì)對(duì)組分吸附牢。
4 、 洗脫
疏水介質(zhì)可用減小鹽濃度進(jìn)行洗脫。加表面活性劑或有機(jī)溶劑可加強(qiáng)洗脫。常用的洗脫液是低鹽濃
度緩沖液，如 0.02~0.05mol/L 的 PBS。
5 、 再生
一般用低鹽濃度的緩沖液洗，洗 10 倍以上柱體積，接著用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。
若有失活蛋白質(zhì)或脂類(lèi)物質(zhì)在再生時(shí)洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。
6 、 在位清洗
（1）對(duì)于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白，可以用 2M Nacl 去除。
（2）對(duì)沉淀蛋白、對(duì)以疏水性結(jié)合的蛋白或脂類(lèi)，可用 1M NaOH 去除。
（3）對(duì)強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂類(lèi)等，用 4~10 倍柱體積的 70%乙醇或 30%異丙醇清洗，但要注意有機(jī)溶
劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡。
清洗完畢后，用少 3 倍緩沖液平衡柱子。
7 、 注意
在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候，要避免柱子流干，氣泡進(jìn)入。
8 、 去熱源
用 0.5M 的氫氧化鈉清洗柱子 5~6 小時(shí)或用 0.1M 的氫氧化鈉 24 小時(shí)?；蛴靡韵路椒ú襟E去除：
（1）2 倍柱體積的 70%乙醇；
（2）2 倍柱體積 50mM Tris-Hcl pH7.5；
（3）1 倍柱體積 4M 尿素；
（4）3 倍柱體積的 Tris 緩沖液+0.1M Nacl；
以上緩沖液都在無(wú)熱源的雙蒸水中配制。
9 、 消毒
用 0.5~1M NaOH 室溫下洗 8~10 倍柱體積，初始緩沖液平衡柱子。
注意事項(xiàng) ：
產(chǎn)品應(yīng)密封貯存在 4℃~30℃（保存溶液為 20% 乙醇+0.1M 醋酸鈉） ，通風(fēng)、干燥、清潔的地方。不能
冷凍。用過(guò)的柱子貯存在 4℃（20% 乙醇） 。