葡萄糖-6-磷酸酶（G6P)檢測試劑盒 糖異生

葡萄糖-6-磷酸酶（G6P）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號：BC3320
規(guī)格：50T/24S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑三：臨用前用8 mL蒸餾水溶解備用。

2. 試劑四：臨用前用8 mL蒸餾水溶解備用。

3. 標準品：10 μmol/mL 磷標準液。臨用前用蒸餾水稀釋16倍至0.625 μmol/mL的標準溶液備用。

4. 工作液的配制：試劑二中加入5 mL試劑一充分溶解備用?？梢詫⒐ぷ饕悍盅b后-20℃保存，禁止反復凍融。

5. 定磷試劑的配制：按H₂O:試劑三:試劑四:試劑五（V:V:V:V）=2:1:1:1的比例配制，配好的定磷劑應為淺黃色。若無色則試劑失效，若是藍色則為磷污染，定磷劑現(xiàn)用現(xiàn)配。

注意：配試劑最好用新的燒杯、玻璃棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
產品說明：
葡萄糖-6-磷酸酶（(glucose 6 phosphatase，G6Pase，EC 3.1.3.9）是一種水解磷酸化合物的磷酸酶，廣泛存在于動物、植物、微生物和細胞中，是糖異生過程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶，在保證血糖的動態(tài)平衡方面起著重要的作用。
G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖和無機磷，利用鉬藍法測定無機磷含量的增加，即可反映G6P活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、低溫臺式離心機、水浴鍋、1mL玻璃比色皿、可調式移液槍、研缽/勻漿器、EP管、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件

注意事項：

1. 建議將樣本用提取液稀釋后再進行測定，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

2. 若A大于1或者顯色完成后有沉淀產生，將上清液或者粗酶液用蒸餾水稀釋后再進行測定。

3. 定磷試劑應現(xiàn)配現(xiàn)用，正常顏色為淺黃色，如有變色或變藍則均為失效。

實驗實例：

1. 取0.1g小鼠肌肉組織加入1mL提取液進行勻漿研磨，取上清后按照測定步驟操作，測得A測定管=0.913、A對照管=0.869、A空白管=0.014、A標準管=0.509，計算ΔA=A測定管-A對照管=0.913-0.869=0.044，ΔA標準=A標準管-A空白管=0.509-0.014=0.495，按樣本質量計算酶活得：

G6P（U/g 質量）=312.5×ΔA÷ΔA標準÷W=312.5×0.044÷0.495÷0.1=277.7778 U/g 質量。

1. 取0.1g稗草加入1mL提取液進行勻漿研磨，取上清后按照測定步驟操作，測得A測定管=0.379、A對照管=0.237、A空白管=0.014、A標準管=0.509，計算ΔA=A測定管-A對照管=0.379-0.237=0.142，ΔA標準=A標準管-A空白管=0.509-0.014=0.495，按樣本質量計算酶活得：

G6P（U/g 質量）=312.5×ΔA÷ΔA標準÷W=312.5×0.142÷0.495÷0.1=896.4646 U/g 質量。
相關發(fā)表文獻：

1. Fan X, Hou T, Jia J, et al. Discrepant dose responses of bisphenol A on oxidative stress and DNA -ation in grass carp ovary cells[J]. Chemosphere, 2020, 248: 126110.

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