蛋白質羰基含量檢測試劑盒 微量法

蛋白質羰基含量檢測試
劑盒說明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC1275
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：使用前根據(jù)樣本數(shù)，每支加1mL水震蕩溶解后離心取上清使用，每支為10個樣本用量，溶液變黑后即不可再繼續(xù)使用。

2. 試劑五：自備乙酸乙酯和無水乙醇，根據(jù)測定樣本量，將乙酸乙酯和無水乙醇等體積混合。（提供1個60mL空瓶）

產(chǎn)品說明：
蛋白質羰基化是指氨基酸殘基側鏈中的氨基或亞氨基受到氧自由基攻擊最后轉變成醛基，并釋放NH₃⁺的過程.其在體內的形成主要是通過金屬離子催化氧化系統(tǒng)完成。蛋白質羰基是多種氨基酸在蛋白質的氧化修飾過程中的早期標志，其含量高低表明蛋白質氧化損傷程度的大小，是衡量蛋白質氧化損傷的主要指標。
羰基與2,4--*反應生成2,4-*腙，在370nm處有特征吸收峰。
Protein Carbonyl + 2, 4-Dinitrophenylhydrazine              2, 4-Dinitrobenzene (370nm)
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
天平、恒溫水浴鍋/培養(yǎng)箱、低溫離心機、超聲細胞破碎儀、漩渦震蕩儀、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔UV板、研缽/勻漿器、蒸餾水、無水乙醇、乙酸乙酯。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
注意事項：
1. 試劑一使用前根據(jù)要測定的樣本數(shù)現(xiàn)配，配置好后4℃保存，若變?yōu)楹谏?，則不能使用。
實驗實例：

1. 取0.1g小鼠心臟加入1mL提取液充分勻漿后于4℃，5000rpm離心10min，取上清，加入0.1mL試劑一，室溫放置10min，4℃，12000rpm離心10min，取上清，按照測定步驟操作，用96孔UV板測得A_370測定管=0.723，A_370對照管=0.609，按樣本質量計算酶活得：

蛋白質羰基含量（μmol/g質量）=（A_370測定管-A_370對照管）÷9.6÷W=0.1188 μmol/g質量。

1. 取0.1g國槐加入1mL提取液充分勻漿后于4℃，5000rpm離心10min，取上清，加入0.1mL試劑一，室溫放置10min，4℃，12000rpm離心10min，取上清，按照測定步驟操作，用96孔UV板測得A_370測定管=0.127，A_370對照管=0.071，按樣本質量計算酶活得：

蛋白質羰基含量（μmol/g質量）=（A_370測定管-A_370對照管）÷9.6÷W=0.0583 μmol/g質量。

1. 取胎牛血清樣本按照說明步驟操作，直接測定，用96孔UV板測得A_370測定管=0.344，A_370對照管=0.145，按液體體積計算酶活得：

蛋白質羰基含量（μmol/mL）=（A_370測定管-A_370對照管）÷10.56=0.0188 μmol/mL。
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