NADP磷酸酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法

NADP磷酸酶（NADPase）活性檢測(cè)試劑盒說明書
微量法
貨號(hào): BC1115
規(guī)格: 100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：用時(shí)加入1.1 mL試劑一充分溶解備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

2. 試劑三：用時(shí)加入8 mL雙蒸水，溶解后2-8℃可保存一周。

3. 試劑四：用時(shí)加入8 mL雙蒸水，溶解后2-8℃可保存一周。

4. 標(biāo)準(zhǔn)品：10 mmol/L 標(biāo)準(zhǔn)磷貯備液。將標(biāo)準(zhǔn)品10倍稀釋，即取1 mL標(biāo)準(zhǔn)品加9 mL蒸餾水，充分混勻，配成1 μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液。

5. 定磷試劑的配制：按H₂O：試劑三：試劑四：試劑五=2:1:1:1的比例配制，配好的定磷試劑應(yīng)為淺黃色，若無色則試劑失效，若是藍(lán)色則為磷污染，定磷試劑根據(jù)實(shí)驗(yàn)用量現(xiàn)用現(xiàn)配。

注意：配試劑最好用新的燒杯、玻璃棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
產(chǎn)品說明：
NADPase主要存在于植物組織中，是生物體內(nèi)催化NADP⁺降解為NAD⁺的酶，與NADK一起調(diào)控NAD和NADP之間的平衡。
NADPase能夠催化NADP⁺水解為NAD⁺和無機(jī)磷的反應(yīng)，通過測(cè)定無機(jī)磷的量來測(cè)定NADPase活性。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、勻漿器/研缽和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1肝加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨，取上清之后按照測(cè)定步驟操作，使用96孔板測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照=0.265-0.254=0.011，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.533-0.047=0.486，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：

NADPase (U/g質(zhì)量) =0.25×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=0.25×0.011÷0.486÷0.1=0.057 U/g質(zhì)量。

1. 取0.1g狗尾巴草（塊根)加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨，取上清之后按照測(cè)定步驟操作，使用96孔板測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照=0.336-0.107=0.229，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.533-0.047=0.486，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：

NADPase (U/g質(zhì)量) =0.25×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=0.25×0.229÷0.486÷0.1=1.18 U/g質(zhì)量。
參考文獻(xiàn)：

1. Kawai S, Mori S, Mukai T, et al. Cytosolic NADP phosphatases I and II from Arthrobacter sp. strain KM: implication in regulation of NAD⁺/NADP⁺ balance[J]. Journal of Basic Microbiology: An International Journal on Biochemistry, Physiology, Genetics, Morphology, and Ecology of Microorganisms, 2004, 44(3): 185-196.

相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0260/BC0265 6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）活性檢測(cè)試劑盒
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