ADPG焦磷酸化酶(AGP)活性檢測(cè)試劑盒 微量法

腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（AGP）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法 
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。
貨號(hào)：BC0435
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前取1瓶試劑二A加入5mL試劑二B充分溶解，用不完的試劑建議-20℃分裝保存4周，避免反復(fù)凍融；

2. 試劑三：臨用前取1瓶加3 mL蒸餾水充分溶解，用不完的試劑建議-20℃分裝保存4周，避免反復(fù)凍融；

3. 試劑四：臨用前取1支加入500 μL蒸餾水充分溶解備用；用不完的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復(fù)凍融。

4. 試劑五：臨用前加入500 μL蒸餾水充分溶解備用；用不完的試劑-20℃分裝保存8周，避免反復(fù)凍融。

產(chǎn)品說(shuō)明：
AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中，催化葡萄糖-1-磷酸與ATP反應(yīng)生成淀粉合成的直接前體ADPG，是植物淀粉生物合成的主要限速步驟。
AGP催化的逆向反應(yīng)生成G-1-P，在反應(yīng)體系中添加的磷酸己糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH，340nm下測(cè)定NADPH增加速率，即可計(jì)算AGP活性。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件
注意事項(xiàng)：

1. 如果一次性測(cè)定樣本較多，可以將試劑一、二按比例配成混合液1，將試劑一、三、四和五按比例配成混合液2。

2. 若測(cè)定數(shù)值較小，可以加大樣本量或者延長(zhǎng)第二步反應(yīng)時(shí)間。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1g柳樹(shù)葉片加入1mL提取液冰浴中勻漿。10000g ，4℃離心10min，取上清置冰上，之后按照測(cè)定步驟操作，用微量石英比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA=A2-A1=0.5784-0.4855=0.0929，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：

AGP活性（U/g 質(zhì)量）=380.5×ΔA÷W=353.48 U/g 質(zhì)量。
參考文獻(xiàn)：

1. Baroja-Fernández E, Zandueta-Criado A, Rodr??guez-López M, et al. Distinct isoforms of ADPglucose pyrophosphatase and ADPglucose pyrophosphorylase occur in the suspension‐cultured cells of sycamore (Acer pseudoplatanus L)[J]. FEBS letters, 2000, 480(2-3): 277-282.

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