3-磷酸甘油酸激酶檢測(cè)試劑盒 微量法

3-磷酸甘油酸激酶（PGK）活
性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法
貨號(hào)：BC2255
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前加入2.5 mL蒸餾水充分溶解后待用，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；

2. 試劑三：臨用前加入1 mL 蒸餾水充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；

3. 試劑四：臨用前加入1 mL 蒸餾水充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；

4. 試劑五：粉劑置于試劑瓶?jī)?nèi)棕色管中。臨用前加入4 mL 蒸餾水充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；

5. 工作液的配制：按照蒸餾水：試劑一：試劑二：試劑三：試劑四：試劑五=6:10:2:1:1:4的體積比例充分混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。

產(chǎn)品說(shuō)明：
3-磷酸甘油酸激酶是糖酵解的關(guān)鍵酶，也是生物得以生存的關(guān)鍵酶。廣泛存在于動(dòng)植物和微生物體內(nèi)，具有影響DNA復(fù)制和修補(bǔ)及刺激病毒RNA合成等生物學(xué)功能，廣泛應(yīng)用于藥物靶標(biāo)設(shè)計(jì)。
3-磷酸甘油酸激酶催化3-磷酸甘油酸和ATP產(chǎn)生1,3-二磷酸甘油酸和ADP，1,3-二磷酸甘油酸在3-磷酸甘油醛脫氫酶和NADH作用下產(chǎn)生3-磷酸甘油醛、NAD和磷酸，引起340nm處的吸光度下降，即反映了3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、微量石英比色皿/96孔UV板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件
注意事項(xiàng)：

1. ΔA大于0.8或者A1測(cè)定小于0.9時(shí)（96孔UV板是當(dāng)ΔA大于0.5或者A1測(cè)定小于0.6時(shí)），建議將粗酶液用提取液稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。當(dāng)ΔA小于0.01時(shí)，可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間（10min或15min）或增加樣本體積來(lái)測(cè)定。

2. 空白管為檢測(cè)各試劑組分質(zhì)量的檢測(cè)孔，正常情況下，變化不超過(guò)0.01。

3. 樣本的蛋白濃度需自行測(cè)定，由于提取液中含有一定濃度的蛋白（約1mg/mL），所以測(cè)定樣本蛋白濃度時(shí)需扣除提取液自身蛋白濃度。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1g白菜加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨，取上清后再用提取液稀釋4倍，之后按照測(cè)定步驟操作，用微量石英比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定管=A1測(cè)定-A2測(cè)定=1.05-0.5559=0.4941，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.9966-0.9941=0.0025，ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白管=0.4941-0.0025=0.4916，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：PGK（U/g 質(zhì)量）=321.54×ΔA÷W×稀釋倍數(shù)= 321.54×0.4916÷0.1×4=6322.7626 U/g 質(zhì)量。

2. 取0.1g小鼠肌肉加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨，取上清后再用提取液稀釋20倍，之后按照測(cè)定步驟操作，用微量石英比色皿測(cè)得計(jì)算，ΔA測(cè)定管=A1測(cè)定-A2測(cè)定=0.9327-0.4518=0.4809，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.9966-0.9941=0.0025，ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白管=0.4809-0.0025=0.4784，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：PGK（U/g 質(zhì)量）=321.54×ΔA÷W×稀釋倍數(shù)= 321.54×0.4784÷0.1×20=30764.9472 U/g 質(zhì)量。

3. 取駱駝血清樣本100μL按照測(cè)定步驟直接測(cè)定，用微量石英比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定管=A1測(cè)定-A2測(cè)定= 1.0435-0.9793=0.0642，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.9966-0.9941=0.0025，ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白管=0.0642-0.0025=0.0617，按液體體積計(jì)算酶活得：PGK（U/mL）=321.54×ΔA=321.54×0.0617=19.8390 U/mL。

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