胃*白酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法

胃*白酶活性檢測(cè)
試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法
貨號(hào)：BC2325
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：臨用前加入10 mL試劑二，充分溶解；

2. 試劑三：臨用前加入10 mL蒸餾水，充分溶解。

產(chǎn)品說(shuō)明：
胃*白酶由胃粘膜主細(xì)胞分泌，分解食物中蛋白質(zhì)成小肽段。一般用于神經(jīng)性低酸癥的鑒別，慢性胃炎、慢性胃擴(kuò)張、慢性十二指腸炎等癥狀時(shí)也會(huì)引起胃*白酶分泌的減少。
胃*白酶可催化血紅蛋白水解，水解產(chǎn)物*氨酸在275nm下有特征吸收峰。通過(guò)測(cè)定吸光值的變化來(lái)計(jì)算酶活。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
操作步驟：具體操作步驟詳見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
稱(chēng)取約0.1g組織加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿或者0.1mL胃液加入0.9mL提取液。10000rpm 4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測(cè)。
二、測(cè)定步驟

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至275nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 操作表：

注意：對(duì)照管后加樣本，而測(cè)定管先加樣本

• 胃*白酶活性計(jì)算

1. 用微量石英比色皿

1、按樣本蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：37℃下每毫克蛋白每分鐘催化血紅蛋白水解生成1μmol*氨酸為一個(gè)酶活單位。
胃*白酶酶活（U/mg prot）=（?A÷ε÷d×V反總）÷（Cpr×V樣本）÷T=0.786×?A÷Cpr
2、按樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義：37℃下每克組織每分鐘催化血紅蛋白水解生成1μmol*氨酸為一個(gè)酶活單位。
胃*白酶酶活（U/g 質(zhì)量）=（?A÷ε÷d×V反總）÷（W×V樣本÷V提）÷T=0.786×?A÷W
3、按液體體積計(jì)算
活性單位定義：37℃下每毫升液體每分鐘催化血紅蛋白水解生成1μmol*氨酸為一個(gè)酶活單位。
胃*白酶酶活（U/mL）=（?A÷ε÷d×V反總）÷（V樣本÷V提×V液）÷T= 7.86×?A
Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測(cè)定；W：樣本質(zhì)量，g；V反總：反應(yīng)總體積，0.22mL；V提：粗酶液總體積，1mL；T：催化反應(yīng)時(shí)間，10min；V樣本：加入樣本體積，0.02mL；V液：液體體積，0.1mL；ε：*氨酸吸光系數(shù)，1.4μmol^-1·mL·cm^-1；d：光程，1cm。
B、用96孔UV板
1、按樣本蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：37℃下每毫克蛋白每分鐘催化血紅蛋白水解生成1μmol*氨酸為一個(gè)酶活單位。
胃*白酶酶活（U/mg prot）=（?A÷ε÷d×V反總）÷（Cpr×V樣本）÷T = 1.31×?A÷Cpr
2、按樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義：37℃下每克組織每分鐘催化血紅蛋白水解生成1μmol*氨酸為一個(gè)酶活單位。
胃*白酶酶活（U/g 質(zhì)量）=（?A÷ε÷d×V反總）÷（W×V樣本÷V提）÷T =1.31×?A÷W
3、按液體體積計(jì)算
活性單位定義：37℃下每毫升液體每分鐘催化血紅蛋白水解生成1μmol*氨酸為一個(gè)酶活單位。
胃*白酶酶活（U/mL）=（?A÷ε÷d×V反總）÷（V樣本÷V提×V液）÷T =13.1×?A
Cpr：粗酶液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測(cè)定；W：樣本質(zhì)量，g；V反總：反應(yīng)總體積，0.22mL；V提：粗酶液總體積，1mL；T：催化反應(yīng)時(shí)間，10min；V樣本：加入樣本體積，0.02mL；V液：液體體積，0.1mL；ε：*氨酸吸光系數(shù)，1.4μmol^-1·mL·cm^-1；d：光程，0.6cm。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1g小鼠胃加入1mL提取液充分研磨，10000rpm 4℃離心10分鐘，取上清稀釋2倍，置冰上，按照測(cè)定步驟操作，使用微量石英比色皿測(cè)得計(jì)算?A=A測(cè)定-A對(duì)照=1.3345-1.2195=0.115，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：

胃*白酶酶活（U/g 質(zhì)量）=0.786×?A÷W×2（稀釋倍數(shù)）=1.808 U/g 質(zhì)量。
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