濾紙酶檢測(cè)試劑盒 微量法

濾紙酶（FPA）活性檢測(cè)試劑盒
說明書
微量法
貨號(hào)：BC2655
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 濾紙條：常溫防潮保存。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品：10mg無水*萄糖。臨用前加入1 mL蒸餾水溶解，配成10 mg/mL 葡萄糖溶液備用，2-8℃保存兩周。

產(chǎn)品說明：
纖維素酶是降解纖維素生成葡萄糖一類酶的總稱，它不是單體酶，而是起協(xié)同作用的多組分酶系。以不溶性纖維素如濾紙為底物測(cè)定的纖維素酶稱為濾紙酶，研究濾紙酶活力對(duì)纖維素酶總體酶活力的研究的有著重要意義。
FPA水解濾紙產(chǎn)生還原糖，還原糖與3,5-二硝基水楊酸反應(yīng)生成在540 nm有特征吸收峰的棕紅色物質(zhì)，通過測(cè)定540 nm處吸光值變化可計(jì)算得FPA活性。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式低溫離心機(jī)、水浴鍋、超聲破碎儀、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水、EP管（2 mL）。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
三、FPA活性計(jì)算

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：

2. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度（x，mg/mL）和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)（y，ΔA標(biāo)準(zhǔn)），建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將ΔA測(cè)定（y，ΔA測(cè)定）帶入公式計(jì)算樣本濃度（x，mg/mL）。

3. FPA活性的計(jì)算：

（1）按蛋白濃度計(jì)算
酶活定義：每mg蛋白每分鐘分解濾紙產(chǎn)生1 mg葡萄糖為1個(gè)酶活力單位。
FPA酶活（U/mg prot）=x×V提取÷（V提取×Cpr）÷T=0.0333x÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活定義：每g樣品每分鐘分解濾紙產(chǎn)生1 mg葡萄糖為1個(gè)酶活力單位。
FPA酶活（U/g 質(zhì)量）=x×V提取÷W÷T=0.0333x÷W
（3）按照細(xì)胞或細(xì)菌數(shù)量計(jì)算
酶活定義：每10⁴個(gè)細(xì)胞每分鐘分解濾紙產(chǎn)生1 mg葡萄糖為1個(gè)酶活力單位。
FPA酶活（U/10⁴ cell）=x×V提取÷細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)）÷T=0.0333x÷細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)）
（4）按液體體積計(jì)算
酶活定義：每mL樣本每分鐘分解濾紙產(chǎn)生1 mg葡萄糖為1個(gè)酶活力單位。
FPA酶活（U/mL）=x×V樣÷V樣÷T=0.0333x
V提取：提取液（蒸餾水）體積，1 mL；V樣：加入的樣本體積，0.1 mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL，蛋白濃度自行測(cè)定；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，30 min。
注意事項(xiàng)：

1. 用干凈的鑷子取出濾紙條，帶手套將濾紙條卷成小卷放入Ep管底部。

2. 當(dāng)A或ΔA超過1時(shí)，建議將樣本用蒸餾水稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

3. 顯色結(jié)束吸取檢測(cè)液時(shí)注意槍頭不要碰到濾紙條，以免帶入毛狀物，影響測(cè)定結(jié)果。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1g平菇傘部加入1mL蒸餾水，冰浴勻漿后于4℃，12000 rpm離心10 min，取上清置于冰上待測(cè)。之后按照測(cè)定步驟操作，使用96孔板測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定管-A對(duì)照管=0.744-0.536=0.208，帶入測(cè)得標(biāo)準(zhǔn)曲線y=1.0495x-0.1471，計(jì)算x=0.3384，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：

FPA酶活（U/g質(zhì)量）=x×V提取÷W÷T=0.0333x÷W=0.113 U/g質(zhì)量。
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