土壤α-葡萄糖苷酶（S-α-GC）檢測試劑盒

土壤α-葡萄糖苷酶(S-α-GC)活性
檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC3085
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：自備甲苯，2-8℃保存；

2. 試劑二：臨用前取1瓶加入5 mL蒸餾水，充分溶解備用，用不完的試劑-20℃分裝保存4周；

3. 標準品：5 mmol/L的對硝 基苯* 溶液。

產(chǎn)品說明：
   S-α-GC能夠催化水解芳基或烴基與糖基原子團之間的糖苷鍵生成葡萄糖，是纖維素分解酶系中重要組成成分之一，在土壤微生物的糖類代謝方面具有重要生理功能。
S-α-GC能夠催化對-硝 基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷生成對-硝 基苯*，后者在400nm有特征光吸收。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、恒溫培養(yǎng)箱/水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、30-50目篩、研缽、甲苯（不允許快遞）和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可參考文獻）
新鮮土樣自然風干或37℃烘箱風干，過30-50目篩。
二、測定步驟

1. 分光光度計/酶標儀預熱30min，調(diào)節(jié)波長至400nm，分光光度計蒸餾水調(diào)零。

2. 標準品：取20μL 5mmol/L的對硝基 苯 * 溶液，加入980μL蒸餾水，充分混勻，配制成100μmol/L標準液使用，現(xiàn)用現(xiàn)配。（實驗中每管需要100μL，為減小實驗誤差，故配制大體積。）

3. 加樣表：

充分混勻，常溫靜置2min 后，測定吸光值A，分別記為A測定管、A對照管、A標準管、A空白管。計算ΔA=A 測定管-A對照管，ΔA標準=A標準管-A空白管。每個測定管設一個對照管。標準管和空白管只需做1-2次
三、S-α-GC 活力計算
單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1μmol對-硝 基苯*定義為一個酶活力單位。
S-α-GC活力（U/g 土樣）=ΔA÷ (ΔA標準÷C標準)×V反總÷W÷T=0.444×ΔA÷ΔA標準÷W
T：反應時間，1h=1/24d；V反總：反應體系總體積：1.85×10^-4L；C標準：標準溶液濃度，100μmol/L；W：樣本質(zhì)量，g。
注意事項：
若ΔA<0.01，可延長37℃水浴時間；若ΔA>1.5，可將上清液稀釋后進行測定；最后計算時注意各個因素的改變。
實驗實例：

1. 取兩管0.02g三葉草土，即為測定管和對照管，按照測定步驟操作，用96孔板測得計算ΔA=A測定管-A對照管=0.421-0.238=0.183，ΔA標準=A標準管-A空白管=0.473-0.047=0.426，計算酶活得：

S-α-GC活力（U/g 土樣）=0.444×ΔA÷ΔA標準÷W=0.444×0.183÷ 0.426÷0.02=9.5366 U/g 土樣。

1. 取兩管0.02g林土樣，即為測定管和對照管，按照測定步驟操作，用96孔板測得計算ΔA=A測定管-A對照管=0.374-0.225=0.149，ΔA標準=A標準管-A空白管=0.473-0.047=0.426，計算酶活得：

S-α-GC活力（U/g 土樣）=0.444×ΔA÷ΔA標準÷W=0.444×0.149÷ 0.426÷0.02=7.7648 U/g 土樣。
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