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  • 莽草酸脫氫酶活性檢測試劑盒 其它系列
產(chǎn)品名稱:

莽草酸脫氫酶活性檢測試劑盒 其它系列

產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-12
儲存條件
-20℃
中文名稱
莽草酸脫氫酶活性檢測試劑盒 其它系列
有效期
6個月
單位

英文名稱
Shikimic acid Dehydrogenase(SD) Activity Assay Kit
檢測方法
紫外分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/48S

產(chǎn)品概述

品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
分子式詳詢純度詳詢
分子量詳詢貨號BC4180
規(guī)格50T/48S供貨周期現(xiàn)貨
主要用途莽草酸脫氫酶(SD)活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合


莽草酸脫氫酶(SD活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
貨號: BC4180
規(guī)格: 50T/48S
產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱規(guī)格保存條件
提取液液體60 mL×1瓶2-8℃保存
試劑一液體20 mL×1瓶2-8℃保存
試劑二粉劑×12-8℃保存
試劑三粉劑×2-20保存
溶液的配制:
  1. 提取液:內(nèi)含不溶物,用前搖勻。

  2. 試劑二:臨用前加入10 mL蒸餾水溶解。

  3. 試劑臨用前每瓶加入11 mL蒸餾水溶解。

  4. 工作液的配制:根據(jù)用量按照試劑一:試劑二:試劑三為7:4:8的體積比例充分混勻,現(xiàn)用現(xiàn)配,用前25℃預(yù)熱15min。

產(chǎn)品說明:
莽草酸途徑是存在于植物和微生物中的一條重要的代謝途徑,莽草酸脫氫酶(EC 1.1.1.25) 是莽草酸合成代謝途徑中催化第四步反應(yīng)的關(guān)鍵酶。
莽草酸脫氫酶催化莽草酸和NADP產(chǎn)生NADPH,檢測340nm下的吸光值增加速率來表示SD活性。
Shikimic Acid +NADP               NADPH(340nm)
注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
自備的儀器和用品
紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、1mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟:
一、樣本處理可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻
1、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液(加入前搖勻))進行冰浴勻漿,然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
2、細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
3液體:直接檢測。
二、測定步驟具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
  1. 紫外分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零。

  2. 工作液25℃預(yù)熱10min以上

  3. 操作表:在1mL石英比色皿中分別加入下列試劑

試劑名稱空白管測定管
工作液(µL)950950
樣本(µL)-50
蒸餾水(µL)50-
加入樣本即開始計時,充分混勻后于340nm處測定20s時的吸光值A15min20s時的吸光值A2,計算ΔA測定管=A2測定-A1測定,ΔA空白管=A2空白-A1空白,ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管(空白管只需做1-2次)。

注意事項
  1. 樣本提取上清液置于冰上待測,且樣本提取完成后建議2h內(nèi)測完。

  2. 樣本的蛋白濃度需自行測定,由于提取液中含有一定濃度的蛋白(約1mg/mL),所以測定樣本蛋白濃度時需扣除提取液自身蛋白濃度。

  3. ΔA大于1時,建議將樣本稀釋后再進行測定。當(dāng)ΔA小于0.01時,可以延長反應(yīng)時間(10min15min)來測定。

  4. 空白管為檢測各試劑組分質(zhì)量的檢測孔,正常情況下,變化不超過0.01

實驗實例:
  1. 0.1g蘿卜葉,加入1mL提取液,進行樣本處理,取上清按照測得步驟操作,測得計算ΔA測定管=A2測定-A1測定=1.441-1.201=0.24ΔA空白管=A2空白-A1空白=0,ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.24,按照樣本質(zhì)量計算得:SD酶活(U/g 質(zhì)量)=643×ΔA÷W=1543.2 U/g 質(zhì)量。

相關(guān)系列產(chǎn)品:

BC2030/BC2035 異檸檬酸裂解酶(ICL)活性檢測檢測試劑盒
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