多聚半乳糖醛酸酶（PG）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
可見(jiàn)分光光度法
貨號(hào)：BC2660
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：若溶液中有晶體析出，37℃水浴溶解；

2. 試劑二：臨用前加入8 mL蒸餾水，60℃水浴助溶；

3. 標(biāo)準(zhǔn)品：10mg半乳糖醛酸。臨用前加入0.943 mL蒸餾水，配成50 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液。

產(chǎn)品說(shuō)明：

多聚半乳糖醛酸酶（Ploygalacturonase，PG）屬果膠酶的一種，廣泛存在于植物、細(xì)菌及真菌中。其催化多聚半乳糖醛酸分解，在果實(shí)軟化、花粉授粉、種子發(fā)育成熟及器官脫落等方面具有重要作用，并且病原菌在侵染宿主植物時(shí)，可分泌多聚半乳糖醛酸酶來(lái)降解宿主細(xì)胞壁，進(jìn)而導(dǎo)致病程發(fā)展。

PG水解多聚半乳糖醛酸生成半乳糖醛酸，半乳糖醛酸與DNS試劑反應(yīng)生成在540 nm有特征吸收峰的棕紅色物質(zhì)，測(cè)定540 nm處吸光值變化可計(jì)算得果膠酶活性。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、低溫臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、1 mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件
注意事項(xiàng)：

1. 樣本提取上清液置于冰上待測(cè)，且樣本提取完成后建議當(dāng)天提取當(dāng)天內(nèi)測(cè)完。

2. 當(dāng)A大于1.2時(shí)，建議將樣本用提取液稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

3. 植物果實(shí)組織建議將樣本稀釋10倍或20倍后再測(cè)定。

4. 若樣本ΔA值偏小，建議延長(zhǎng)酶促反應(yīng)時(shí)間，并在計(jì)算公式中除以相應(yīng)時(shí)間。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1g鮮梨加入1mL提取液冰浴勻漿后于4℃，16000 g，離心10 min，取上清稀釋5倍后按照測(cè)定步驟操作，測(cè)得計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管=0.912-0.882=0.03，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.1127x-0.1207，計(jì)算得x=1.337，按樣本質(zhì)量計(jì)算：

PG酶活（U/g質(zhì)量）= 0.5x÷W×5（稀釋倍數(shù)）=33.43 U/g質(zhì)量。
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