LPS脂多糖 糖與碳水化合物

LPS脂多糖 糖與碳水化合物

Lipopolysaccharides From Escherichia coli 055:B5

L8880 脂多糖產(chǎn)品進(jìn)口分裝的，脂多糖效價(jià)大于等于500000 EU每mg，但每批產(chǎn)品效價(jià)有一定差別，我們產(chǎn)品主要是提供脂多糖的活性，相關(guān)應(yīng)用方面的實(shí)驗(yàn)需要客戶自己摸索和優(yōu)化。

說明：

①脂質(zhì)和多糖的復(fù)合物；②為革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁的主要成分，脂多糖是內(nèi)毒素的重要群特異性抗原(O抗原)。脂多糖由三部分組成。脂質(zhì)A(Lipid A)為構(gòu)成內(nèi)毒素活性的糖脂，以共價(jià)鍵聯(lián)結(jié)到雜多糖鏈，有兩部分：一是核心多糖，在有關(guān)的株內(nèi)是恒定的；另一O特異性鏈(O-specific chain)是高度可變的。大腸桿菌的脂多糖在實(shí)驗(yàn)室免疫學(xué)中是常用的B細(xì)胞促分裂因子即多克隆活化因子(polyclonal activator)?？捎糜诩?xì)胞培養(yǎng)。

簡介：

脂多糖，英文名稱Lipopolysaccharides，簡稱LPS，是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁中的一種*成分，位于細(xì)胞壁的外層并暴露于非莢膜細(xì)菌的細(xì)胞表面，有利于維持細(xì)胞外膜的完整性，保護(hù)細(xì)菌免受膽汁鹽和脂類抗生素的破壞。結(jié)構(gòu)上，脂多糖由類脂A、核心多糖和O-多糖側(cè)鏈組成。其中類脂質(zhì)A是構(gòu)成細(xì)菌內(nèi)毒素的主要成分，決定其毒性強(qiáng)弱；而O-多糖側(cè)鏈在不同細(xì)菌間是高度變化的，特異性決定細(xì)菌的血清型。
LPS可以引起免疫刺激的級聯(lián)反應(yīng)和機(jī)體的毒性病理生理活動，包括釋放內(nèi)毒素引起感染性休克從而導(dǎo)致末梢血管虛脫。臨床常通過檢測LPS的存在來診斷腦膜炎。正是LPS與機(jī)體免疫機(jī)能的密切關(guān)系，生命科學(xué)研究常常提取LPS進(jìn)行相關(guān)的研究，如闡明LPS的結(jié)構(gòu)，代謝，免疫學(xué)，生理學(xué)，毒性，生物合成途徑；誘導(dǎo)生長促進(jìn)因子如白介素的合成與分泌；誘導(dǎo)疾病研究的動物模型如炎癥反應(yīng)，急性肺損傷。將LPS分別與FITC、TRITC或2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid (TNBSA)反應(yīng)即可得到FITC、TRITC或TNP標(biāo)記的LPS，主要用于非胸腺依賴性B細(xì)胞對細(xì)菌LPS的免疫應(yīng)答研究。。
LPS可通過TCA、酚、酚-lv仿-石油mi等方法制備，其中后一種方法為粗提取法。TCA和酚提取得到的LPS在結(jié)構(gòu)上、電泳圖譜和內(nèi)毒素水平均較相似，不同之處在于含有的核酸和蛋白質(zhì)殘留量不同，TCA法得到的LPS含有約2%的RNA和10%的變性蛋白。酚法提取的LPS含有達(dá)60%的RNA和少于1%的蛋白。用凝膠過濾層析可除去酚提取LPS中的殘留蛋白，但是仍會留下約10-20%的核酸。進(jìn)一步用離子交換層析法純化可得到＜1%蛋白和＜1%RNA的LPS。

本品來源于血清型大腸桿菌O55:B5，用苯法提取而得。其內(nèi)毒素水平不少于500,000 EU (endotoxin units)/mg，經(jīng)分析，1ng相當(dāng)于0.5EU（鱟試劑法）和10EU（顯色法）。LPS O55:B5可用于刺激人腹腔巨噬細(xì)胞（1ng/ml）以及馬腹腔巨噬細(xì)胞的活動（1-100ng/ml）。

來源：Escherichia coli 055:B5

溶解性:可溶于水(10mg/ml)或細(xì)胞培養(yǎng)基(1mg/ml)，產(chǎn)生渾濁淡黃色溶液，溶于鹽溶液經(jīng)旋渦振蕩并加熱到70-80℃可得到一種濃度更高的LPS溶液（20mg/ml）。

使用方法：

1. LPS粉末是非無菌的，用于細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)實(shí)驗(yàn)需要過濾除菌，LPS儲存液的配置：將1mg LPS重懸于1ml無菌平衡鹽溶液或細(xì)胞培養(yǎng)基，輕輕旋渦振蕩直粉末*溶解，即得到1mg/ml的儲存液。此儲存液可進(jìn)一步用無菌平衡鹽或細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋需要的工作濃度。

2. LPS儲存液的保存：本儲存液（1mg/ml）可放在4℃保存，約一個月穩(wěn)定；也可分裝成單次用量后放到-20℃，2年穩(wěn)定。避免反復(fù)凍融。

【注意】：1）LPS溶液應(yīng)儲存于硅烷化容器內(nèi)，因?yàn)長PS可吸附于塑料或某些玻璃器皿，尤其當(dāng)其濃度＜0.1mg/ml時(shí)。但當(dāng)LPS濃度大于1mg/ml時(shí)，上述吸附則可忽略不計(jì)。2）如使用玻璃器皿，則需旋渦振蕩LPS溶液少30min，以重溶被吸附溶質(zhì)。

注意事項(xiàng)

為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

參考文獻(xiàn)：

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