考馬斯亮藍法測蛋白含量測定 試劑盒

考馬斯亮藍法測蛋白含量測定 試劑盒說明書
酶標(biāo)法 100 管/96 樣
產(chǎn)品簡介 ：
樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計算。此外，可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。
在酸性溶液中，考馬斯亮藍 G-250 與蛋白質(zhì)結(jié)合形成藍色復(fù)合物；該復(fù)合物在 595nm 處有大吸收峰，
其顏色的深淺與蛋白質(zhì)的濃度成正比。該方法靈敏度高，適合微量蛋白質(zhì)分析。
試驗中所需的儀器和試劑：
酶標(biāo)儀、酶標(biāo)板、移液器和蒸餾水。
產(chǎn)品內(nèi)容 ：
試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。
標(biāo)準品：液體×1 瓶，4℃保存。
操洽步驟 ：
一 、 樣品中可溶性蛋白質(zhì) 提取 ：
液體樣品：澄清無色液體樣品可以直接測定。
組織樣品：準確稱取約 0.1 g 樣品，加 1mL 提取液（ 自備，根據(jù)需要可以是酶提取緩沖液或者蒸餾水或
者生理鹽水） ，冰浴勻漿，10000rpm，4℃離心 10min，取上清，即待測液。 （動物樣品常常需要稀釋）
二 、 吸光值測定 ：
1. 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min 以上，調(diào)節(jié)波長到 595nm，蒸餾水調(diào)零。
2.  空白 孔： 取酶標(biāo)板， 在空白孔中加入 20µL  蒸餾水， 180µL 試劑一， 混勻后室溫靜置 10min， 于 595nm
測定吸光度，20min 內(nèi)完成測定，記為 A 空白。
3.  標(biāo) 準 孔： 取酶標(biāo)板， 在空白孔中加入 20µL  標(biāo)準液， 180µL 試劑一， 混勻后室溫靜置 10min， 于 595nm
測定吸光度，20min 內(nèi)完成測定，記為 A 標(biāo)準。
4.  測定 孔： 取酶標(biāo)板， 在空白孔中加入 20µL  待測液， 180µL 試劑一， 混勻后室溫靜置 10min， 于 595nm
測定吸光度，20min 內(nèi)完成測定，記為 A 測定。
蛋?質(zhì)含量 計 算 ：
C 待測（µg/m L）= C 標(biāo)準×(A 測定－A 空白)÷(A 標(biāo)準－A 空白)
=50×(A 測定－A 空白)÷(A 標(biāo)準－A 空白)
C 標(biāo)準：標(biāo)準品蛋白質(zhì)濃度，50µg/mL。
注意事項 ：
1．加考馬斯亮藍后，在 10~20min 內(nèi)吸光值相對較穩(wěn)定，因此須在 10~20min 完成比色。
2．不宜用石英比色皿，可用玻璃或塑料比色皿，測完成后立即用 95%乙醇（ 自備）沖洗。
3．測定前用 1~2 個樣做預(yù)實驗，確保蛋白濃度在 0~100µg/ml 范圍內(nèi)，否則需要做相應(yīng)稀釋。