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| 品牌 | SOLARBIO/索萊寶 | CAS | 詳詢(xún) |
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| 分子式 | 詳詢(xún) | 純度 | 詳詢(xún) |
| 分子量 | 詳詢(xún) | 貨號(hào) | BC0860 |
| 規(guī)格 | 50T/24S | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
| 主要用途 | 測(cè)定意義：土壤蛋白酶參與土壤中存在的氨基酸、蛋白質(zhì)以及其他含蛋白質(zhì)氮的有機(jī)化合物 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
土壤酸性蛋白酶活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
可見(jiàn)分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。
貨號(hào)：BC0860
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱(chēng) | 規(guī)格 | 保存條件 |
| 試劑一 | 液體20 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑二 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑三 | 液體12 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑四 | 液體40 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑五 | 液體10 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑六 | 液體15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 標(biāo)準(zhǔn)品 | 液體1 mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
試劑二：臨用前加入10 mL試劑六，沸水浴攪拌溶解后待用，用不完的試劑2-8℃保存1個(gè)月。
標(biāo)準(zhǔn)品：20μmol/mL 酪*酸溶液。
產(chǎn)品說(shuō)明：
土壤蛋白酶參與土壤中存在的氨基酸、蛋白質(zhì)以及其他含蛋白質(zhì)氮的有機(jī)化合物的轉(zhuǎn)化，其水解產(chǎn)物是高等植物的氮源之一。土壤酸性蛋白酶在酸性環(huán)境下催化蛋白質(zhì)水解，與土壤有機(jī)質(zhì)含量、氮素及其他土壤性質(zhì)有關(guān)。酸性條件下，土壤酸性蛋白酶可將酪蛋白水解產(chǎn)生酪*酸；在堿性條件下，酪*酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍(lán)，在680nm有特征吸收峰。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液槍、1mL玻璃比色皿、臺(tái)式離心機(jī)、研缽、蒸餾水、30-50目篩。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱風(fēng)干，過(guò)30~50目篩。
二、測(cè)定步驟
分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至680nm，蒸餾水調(diào)零。
標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋?zhuān)喝?0μL 20μmol/mL酪*酸標(biāo)準(zhǔn)液，加入990μL蒸餾水，充分混勻，配制成0.2μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液使用，現(xiàn)用現(xiàn)配。（實(shí)驗(yàn)中每管需要220μL，為減小實(shí)驗(yàn)誤差，故配制大體積。）
樣本測(cè)定
| 試劑名稱(chēng) | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 |
| 風(fēng)干土樣（g） | 0.1 | 0.1 | - | - |
| 試劑一（μL） | 200 | 200 | - | - |
| 試劑二（μL） | 100 | - | - | |
| 充分混勻后，37℃水浴/恒溫培養(yǎng)箱中反應(yīng)24h，期間振蕩5-6 次，使土樣與反應(yīng)液充分接觸。 | - | - | ||
| 試劑三（μL） | 200 | 200 | - | - |
| 試劑二（μL） | - | 100 | - | - |
| 混勻，10000rpm 室溫離心10min，取上清液待測(cè) | - | - | ||
| 上清液（μL） | 220 | 220 | - | - |
| 0.2μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液（μL） | - | - | 220 | - |
| 蒸餾水（μL） | - | - | - | 220 |
| 試劑四（μL） | 650 | 650 | 650 | 650 |
| 試劑五（μL） | 130 | 130 | 130 | 130 |
| 混勻，40℃水浴或恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)10min，10000rpm室溫離心10min，取上清液于680nm下讀取各管吸光值A，分別記為A測(cè)定管、A對(duì)照管、A標(biāo)準(zhǔn)管、A空白管，計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定管-A對(duì)照管，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。（標(biāo)準(zhǔn)管、空白管只需測(cè)1-2次，每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管） | ||||
三、土壤酸性蛋白酶活性計(jì)算
單位定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1μmol的酪*酸為一個(gè)土壤酸性蛋白酶活力單位。
土壤酸性蛋白酶(U/g 土樣)=C標(biāo)準(zhǔn)×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×V反總÷W÷T=0.1×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W
C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，0.2μmol/mL；V反總：反應(yīng)體系總體積，0.5mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1d；W：樣本質(zhì)量，g。
注意事項(xiàng)：
當(dāng)吸光值大于1時(shí)，建議將上清液用蒸餾水稀釋后進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算時(shí)注意乘以稀釋倍數(shù)。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
分別稱(chēng)取2份0.1g土樣于1.5mLEP管中，分別為對(duì)照管及測(cè)定管。按照測(cè)定步驟操作，使用1mL玻璃比色皿測(cè)定吸光度，計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定管-A對(duì)照管=0.206-0.178=0.028，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.540-0.028=0.512，按土壤質(zhì)量計(jì)算酶活得：
土壤酸性蛋白酶(U/g 土樣)= 0.1×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W= 0.1×0.028÷0.512÷0.1= 0.0547U/g土樣。
分別稱(chēng)取2份0.1g三葉草土樣于1.5mLEP管中，分別為對(duì)照管及測(cè)定管。按照測(cè)定步驟操作，使用1mL玻璃比色皿測(cè)定吸光度，計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定管-A對(duì)照管=0.831-0.612=0.219，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.540-0.028=0.512，按土壤質(zhì)量計(jì)算酶活得：
土壤酸性蛋白酶(U/g 土樣)= 0.1×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W= 0.1×0.219÷0.512÷0.1=0.0313 U/g土樣。
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0270/BC0275 土壤中性*白酶活性檢測(cè)試劑盒
BC0880/BC0885 土壤堿性蛋白酶（S-ALPT）活性檢測(cè)試劑盒
土壤酸性蛋白酶活性檢測(cè)試劑盒
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