TEV蛋白酶 酶、輔酶

TEV蛋白酶 酶、輔酶
貨號：TEVDAB-1000U
規(guī)格：1000u
品牌：solarbio

別名 : rTEV 
英文名稱 : rTEV 
儲存條件 : -70℃/-20℃ 
單位 : 支 
外觀（性狀） : 凍干粉

產(chǎn)品說明：
    rTEV蛋白酶(重組型)是經(jīng)過基因工程改造后的重組蛋白酶，該酶特異性識別Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe- Gln-Gly七氨基酸序列。rTEV蛋白酶與腸激酶U(EK)、Thrombin、Factor Xa、SUMO等蛋白酶相比，具有高活性、高特異性的雙重特點，rTEV蛋白酶因具有高剪切活性和特異性，已成為融合蛋白表達后去除融合tag的*蛋白酶。該酶經(jīng)6×His標(biāo)簽純化而得(含組氨酸標(biāo)簽)，純度達99％，剪切反應(yīng)完畢后可通過Ni-NTA Resin(Cat.No.P2010, Solarbio)去除。該酶在2-8℃-30℃溫度、pH范圍(6.0-8.5)反應(yīng)條件下均具有活性

活性定義: 在1XrTEV Buffer(50 mM，pH8.0, 0.5 mM EDTA, 1mM DTT)，30℃反應(yīng)1h，剪切>85％的3 μg底物所需要的酶量定義為一個活性單位。

保存條件: 長期儲存-70℃，可儲存1年，-20℃，可儲存6個月。
 

    該酶經(jīng) 6×His 標(biāo)簽純化而得(含組胺酸標(biāo)簽)，純度達99％， 剪切反應(yīng)完畢后可通過His標(biāo)簽純化樹脂Ni-NTA Resin(Cat.No. P2010)去除，以達到純化目的蛋白的目的。

表1. 不同溫度下rTEV酶切活性

    影響天然TEV酶活性的常見因素：1）PMSF和AEBSF（1 mM），TLCK（1 mM），Bestatin（1 mg/ml）、Pestatin A（1 mM），EDTA（1 mM）以及E-64（3 mg/ml），以上這些蛋白酶抑制劑對rTEV的活性沒有影響；2）Zn離子（＞5 mM）對rTEV活性有抑制；3）與半胱氨酸反應(yīng)的試劑也是rTEV的潛在抑制劑。

    表達方式: A DNA sequence encoding the TEV Protease （NP_062908） （Gly 2038- Gly 2280） was fused with polyhistidine tag at the N-terminus, with a Ser 2256 Asn mutation 
種屬:Human
表達宿主: E.Coli
QC Testing
純度:> 95%, as determined by SDS-PAGE 
內(nèi)毒素:< ﹤1.0 EU per 1μg cytokine as determined by the LAL method.
穩(wěn)定性:Samples are stable for up to twelve months from date of receipt -70°C 
預(yù)測N端: Met 1 
分子量:The recombinant human TEV protease consists of 251 amino acids and has a predicted molecular mass of 28.6 kDa. As estimated in SDS-PAGE under reducing conditions. 
緩沖液: Supplied as a 0.2μm filtered solution of 50mM Tris, 10%Sucrose,5mM DTT pH8.0 
SDS-PAGE: 
Usage Guide
儲存方法:Store it under sterile conditions at -70℃. It is recommended that the protein be aliquoted for optimal storage and usage. Avoid repeated freeze-thaw cycles. 

使用方法說明：
1. 推薦使用溶液：50 mM NaH2PO4, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM DTT, 10%甘油，pH 8.0 buffer中進行剪切。
2. 250×rTEV Protease Buffer：250mM EDTA, 250 mM DTT, PH 8.0
3. rTEV 蛋白酶與需要酶切的目的蛋白比例：1：100
4. 酶切體系：

融合蛋白 1000 μg
250×rTEV Protease Buffer 4μL
rTEV 蛋白酶 2μL
定容 1000μL
定容緩沖液：50 mM NaH2PO4, 150mM NaCl
5. 酶切條件：在 16℃酶切 6hr。用戶可以根據(jù)自己研究的目的蛋白進行摸索酶切條件，可適當(dāng)加大酶量或延長酶切時間。
6. 可取少量樣本進行 SDS-PAGE 分析，若要去除酶切后體系中的 rTEV 蛋白酶，可用 His 標(biāo)簽純化樹脂親和層析。

TEV蛋白酶 酶、輔酶

參考文獻：

《CRISPR-Cas9 Mediated RNase L Knockout Regulates Cellular Function of PK-15 Cells and Increases PRV Replication》 作者:Chao Sui, Dandan Jiang, Xiangju Wu, Xiaoyan Cong, Feng Li, Yingli Shang, Jinqiu Wang, Sidang Liu, Hu Shan, Jing Qi, and Yijun Du 期刊:BioMed Research International 影響因子:2.197 PMID:30941371

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