中性轉(zhuǎn)化酶（NI）活性檢測(cè)試劑盒 蔗糖

中性轉(zhuǎn)化酶（NI）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法
貨號(hào)：BC0575
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。 溶液的配制：
1、試劑二：臨用前加入20mL試劑一充分溶解備用；用不完的試劑4℃保存；
2、標(biāo)準(zhǔn)品：10mg葡萄糖，臨用前加入1mL蒸餾水溶解,制備10mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液備用。
產(chǎn)品說(shuō)明：
蔗糖轉(zhuǎn)化酶（Invertase，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代謝關(guān)鍵酶之一。根據(jù)最適 pH，將高等植物Ivr分為酸性轉(zhuǎn)化酶（AI）和中性轉(zhuǎn)化酶（NI）兩種類型。NI主要存在于細(xì)胞質(zhì)中，負(fù)責(zé)分解細(xì)胞質(zhì)中蔗糖為果糖和葡萄糖。
NI催化蔗糖分解產(chǎn)生還原糖，進(jìn)一步與3,5－二硝基水楊酸反應(yīng)，生成棕紅色氨基化合物，在540nm有特征光吸收，在一定范圍內(nèi)540nm光吸收值與還原糖生成量成正比。通過(guò)光吸收增加速率來(lái)計(jì)算NI活性。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
“具體操作步驟詳見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件"
注意事項(xiàng)：

1. 如果加入試劑三，煮沸10min后有混濁物出現(xiàn)，建議離心除去沉淀后，取上清測(cè)定吸光度；

2. 如果吸光值大于1，可以用蒸餾水將樣本稀釋后測(cè)定（計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)）。

3. 由于提取液中含有一定濃度的蛋白（約1mg/mL），所以在測(cè)定樣本蛋白濃度時(shí)需要減去提取液本身的蛋白含量。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1g冬青加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨，取上清稀釋2倍后按照步驟操作，用96孔板測(cè)得計(jì)算A測(cè)定=0.686，A對(duì)照=0.599，ΔA=A測(cè)定-A對(duì)照=0.686-0.599=0.087，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y = 0.7035x + 0.0263， 計(jì)算x=（0.087-0.0263）/0.7035=0.086，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：

NI活性（U/g 質(zhì)量）=33.3 ×x÷W×稀釋倍數(shù)=33.3 ×0.086÷0.1×2=57.276 U/g 質(zhì)量。
參考文獻(xiàn)：

1. Huang Y W, Nie Y X, Wan Y Y, et al. Exogenous glucose regulates activities of antioxidant enzyme, soluble acid invertase and neutral invertase and alleviates dehydration stress of cucumber seedlings[J]. Scientia horticulturae, 2013,162: 20-30.

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